醫(yī)學(xué)第七組ppt課件(編輯修改稿)
2025-04-18 06:22 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 ker 1 2 bp 2022 1000 750 500 250 100 單元三 ? 重組 DNA在大腸桿菌中的 誘導(dǎo)表達(dá) 實(shí)驗(yàn)原理 ——乳糖操縱子的調(diào)控機(jī)制 實(shí)驗(yàn)流程 1 2 3 4 菌體活化、放大 誘導(dǎo) 收菌 紫外燈觀察、超破 紫外燈下（ UV365nm） 1 5管觀察結(jié)果 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析 ? 1為陰性對(duì)照組，所用工程菌 并不含有 GFP序列 ，故不能表達(dá)熒光蛋白，紫外燈下無(wú)熒光。 ? 2未加入 IPTG和葡萄糖，但其培養(yǎng)基中含有乳糖，故 2中存在 異構(gòu)乳糖的誘導(dǎo)效應(yīng) ，不存在葡萄糖降解物阻遏效應(yīng)，又因乳糖含量較低， 2出現(xiàn)微弱的熒光。 ? 3培養(yǎng)過(guò)程中同時(shí)加入了 IPTG和葡萄糖，故大腸桿菌細(xì)胞優(yōu)先利用葡萄糖， GFP的表達(dá)被抑制 ，無(wú)熒光。 ? 4培養(yǎng)中加入了 IPTG，無(wú)葡萄糖， IPTG持久誘導(dǎo) GFP的表達(dá)產(chǎn)生大量的綠色熒光蛋白 ，故 4發(fā)出非常明顯的熒光。 ? 5為 4第三次離心的上清液，無(wú)熒光。原因是實(shí)驗(yàn)中采用原核細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)，外源基因的表達(dá)產(chǎn)物往往在胞漿中聚集 形成均一密度的包涵體 ，三次離心后細(xì)胞沉在底部，上清液中沒(méi)有或極少細(xì)胞，故無(wú)熒光。 單元四 ? 重組蛋白的分離純化及檢測(cè) 實(shí)驗(yàn)原理 ? :以普通凝膠作載體，連接上金屬離子制成螯合吸附劑，用于分離純化蛋白質(zhì)，這種方法稱為金屬螯合親和層析。 ? :由丙稀酰胺單體（ acrylamide)和交聯(lián)試劑 N，N’－甲叉雙丙稀酰胺（ N,Nmethylene bisacrylamide)在催化劑存在的情況下聚合而成的三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠，改變單體的濃度與交聯(lián)劑的比例，可以得到不同孔徑大小的凝膠。本實(shí)驗(yàn)采用化學(xué)聚合法制膠，進(jìn)行不連續(xù)電泳，并用考馬斯亮藍(lán)快速染色，以分離和鑒定純化的蛋白產(chǎn)物。 ? blot:蛋白質(zhì)樣品經(jīng)
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