醫(yī)學第七組ppt課件(編輯修改稿)
2025-04-18 06:22 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 ker 1 2 bp 2022 1000 750 500 250 100 單元三 ? 重組 DNA在大腸桿菌中的 誘導表達 實驗原理 ——乳糖操縱子的調(diào)控機制 實驗流程 1 2 3 4 菌體活化、放大 誘導 收菌 紫外燈觀察、超破 紫外燈下（ UV365nm） 1 5管觀察結果 實驗結果 實驗結果分析 ? 1為陰性對照組，所用工程菌 并不含有 GFP序列 ，故不能表達熒光蛋白，紫外燈下無熒光。 ? 2未加入 IPTG和葡萄糖，但其培養(yǎng)基中含有乳糖，故 2中存在 異構乳糖的誘導效應 ，不存在葡萄糖降解物阻遏效應，又因乳糖含量較低， 2出現(xiàn)微弱的熒光。 ? 3培養(yǎng)過程中同時加入了 IPTG和葡萄糖，故大腸桿菌細胞優(yōu)先利用葡萄糖， GFP的表達被抑制 ，無熒光。 ? 4培養(yǎng)中加入了 IPTG，無葡萄糖， IPTG持久誘導 GFP的表達產(chǎn)生大量的綠色熒光蛋白 ，故 4發(fā)出非常明顯的熒光。 ? 5為 4第三次離心的上清液，無熒光。原因是實驗中采用原核細胞表達系統(tǒng)，外源基因的表達產(chǎn)物往往在胞漿中聚集 形成均一密度的包涵體 ，三次離心后細胞沉在底部，上清液中沒有或極少細胞，故無熒光。 單元四 ? 重組蛋白的分離純化及檢測 實驗原理 ? :以普通凝膠作載體，連接上金屬離子制成螯合吸附劑，用于分離純化蛋白質，這種方法稱為金屬螯合親和層析。 ? :由丙稀酰胺單體（ acrylamide)和交聯(lián)試劑 N，N’－甲叉雙丙稀酰胺（ N,Nmethylene bisacrylamide)在催化劑存在的情況下聚合而成的三維網(wǎng)狀結構的凝膠，改變單體的濃度與交聯(lián)劑的比例，可以得到不同孔徑大小的凝膠。本實驗采用化學聚合法制膠，進行不連續(xù)電泳，并用考馬斯亮藍快速染色，以分離和鑒定純化的蛋白產(chǎn)物。 ? blot:蛋白質樣品經(jīng)
教學教案相關推薦
鄂ICP備17016276號-1