畢業(yè)論文中英文文獻翻譯生物技術專業(yè)畢業(yè)論文(編輯修改稿)
2024-11-26 19:30 本頁面
【文章內容簡介】 SspI, StuI, StyI and XbaI)消化雙親型 LDN(DIC6B) 和 LDN 的基因，并用 Southern 印跡映射組成 DNA 的RFLP。 比較繪圖 使用下面的方法，鑒定了來自 64kb 共線性水稻序列的水稻基因和他們的小麥純合子，預測開放閱讀框 (ORFs)，從 TIGR automatic annotation ( 和 Gramene ( //內含子界限。通過使用蛋白和 DNA 數據庫， EST 數據庫，使用 BLASTN, BLASTX, BLASTNP 對預測編碼區(qū)的可能進行了測驗。在 TIGR 和 TREP 數據庫中研究 BAC AP005647 的水稻閱讀框預測小麥純合體序列，消除預測蛋白的重復元素。 物理圖譜 RSL65,四倍體小麥 BAC 文庫的 28 個高密度過濾器，通過使用 GpcB1 雜交探針，發(fā)現其上面 30cm的 DIC 6SBS 染色體片段包含了高 GPC 基因 (Cenci et al., 2020)。通過 PCR 和 southern 印跡驗證了正向的 BAC 克隆。為了建立 BAC 克隆的基因位點區(qū)域，用基因特異性引物對 N6AT6B 和 N6BT6A 試驗。用 SNapshot labeling kit 試劑盒和毛細管電泳法辨別了 BAC 的正向克隆。 沈陽農業(yè)大學學士學位論文外文翻譯 4 BAC 的末端排序 BAC 的末端排序使用參照 DNA walking SpeedUP kit 說明書方法進行 ，載體的引物根據pIndigoBAC536 BAC 載體序列設計。包括 Outer T7end 5′ GTTTTCCCAGTCACGACGTT3′ , Inner T7end 5′ ACGACTCACTATAGGGCGAAT3′ , Outer SP6end 5′ TGTGGAATTGTGAGCGGATA3′ , and Inner SP6 end 5′ CGCCAAGCTATTTAGGTGACA3′ .依據試劑盒的提供的 ACP 去捕獲未知的目標序列位點。使用這種方法，我們能擴增 4005000bp 的片段， 這些產物進瓊脂糖凝膠純化，用 pGEMT 試劑盒克隆，并測序。 結果 堅 定了來自水稻低拷貝數量的候選基因 來自 2 號染色體的 64kb 染色體片段與小麥 的 GpcB1 區(qū)域呈共線性 (Distelfeldet al., 2020),包括 11 個推測的基因，其中 4 個在 TREP 數據庫或 TIGR 數據庫未知轉座子元件有重要相似性，其中的 2 個與別的蛋白或是植物中的任何 EST 無重大的相關性。通過 (Table 1).揭示了五種水稻和小麥的重要相似性。設計的基因引物成功的擴增出了來自 LDN 的基因 DNA 的 4 個 ESTs。 4 個 ESTs 的 PCR產物作為探針 ,在 southern 印跡法中雜交用限制性內切酶消化的雙親型 DNA。 EST BQ609014 雜交結果出現多條帶表明該基因是一個多基因家族，而其余三個 ESTs 出現一條帶或兩條帶，表明是單拷貝或是多拷貝基因。盡管大量的限制性內切酶被篩選，在雙親線中沒有發(fā)現多態(tài)性。因此， PCR 標記比ESTs 標記更成熟。 PCR 標記在 BQ789353, BE444066 和 AL826407 中的應用 BQ789353 引物擴增出 466bp 產物， 通過 466bp UHW83 探針發(fā)現了 8 個確定的 BAC 克隆，只有一 個屬于 B 基因組。 用 HindIII 酶切包含 BAC 的 BAC 770E02 出一個 5500kb 的片段，并測序。通過 CAPS標記找到了一個單核苷酸多態(tài)性 SNP。用限制新內切酶 HaeIII得到 LDN(DIC6B)的 307bp和 106bp 片段， LDN 的 413bp 片段。這種多態(tài)性被用于 Xuhw83 作圖。 BE444066 按（表 1）使用設計的引物從 LDN 從得到了 750bp 片段，用限制性酶 StyI酶切 DIC 得到 432bp 和 117bp 片段， StyI 酶切 LDN 得到 549bp 片段，這些與 GpcB1 位點重要聯系多態(tài)性被用于 Xuhw83 作圖。 AL826407 使用 HindIII 消化 AL826407
公司管理相關推薦
鄂ICP備17016276號-1