畢業(yè)論文中英文文獻(xiàn)翻譯生物技術(shù)專業(yè)畢業(yè)論文(編輯修改稿)
2024-11-26 19:30 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 SspI, StuI, StyI and XbaI)消化雙親型 LDN(DIC6B) 和 LDN 的基因，并用 Southern 印跡映射組成 DNA 的RFLP。 比較繪圖 使用下面的方法，鑒定了來自 64kb 共線性水稻序列的水稻基因和他們的小麥純合子，預(yù)測開放閱讀框 (ORFs)，從 TIGR automatic annotation ( 和 Gramene ( //內(nèi)含子界限。通過使用蛋白和 DNA 數(shù)據(jù)庫， EST 數(shù)據(jù)庫，使用 BLASTN, BLASTX, BLASTNP 對預(yù)測編碼區(qū)的可能進(jìn)行了測驗(yàn)。在 TIGR 和 TREP 數(shù)據(jù)庫中研究 BAC AP005647 的水稻閱讀框預(yù)測小麥純合體序列，消除預(yù)測蛋白的重復(fù)元素。 物理圖譜 RSL65,四倍體小麥 BAC 文庫的 28 個(gè)高密度過濾器，通過使用 GpcB1 雜交探針，發(fā)現(xiàn)其上面 30cm的 DIC 6SBS 染色體片段包含了高 GPC 基因 (Cenci et al., 2020)。通過 PCR 和 southern 印跡驗(yàn)證了正向的 BAC 克隆。為了建立 BAC 克隆的基因位點(diǎn)區(qū)域，用基因特異性引物對 N6AT6B 和 N6BT6A 試驗(yàn)。用 SNapshot labeling kit 試劑盒和毛細(xì)管電泳法辨別了 BAC 的正向克隆。 沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)士學(xué)位論文外文翻譯 4 BAC 的末端排序 BAC 的末端排序使用參照 DNA walking SpeedUP kit 說明書方法進(jìn)行 ，載體的引物根據(jù)pIndigoBAC536 BAC 載體序列設(shè)計(jì)。包括 Outer T7end 5′ GTTTTCCCAGTCACGACGTT3′ , Inner T7end 5′ ACGACTCACTATAGGGCGAAT3′ , Outer SP6end 5′ TGTGGAATTGTGAGCGGATA3′ , and Inner SP6 end 5′ CGCCAAGCTATTTAGGTGACA3′ .依據(jù)試劑盒的提供的 ACP 去捕獲未知的目標(biāo)序列位點(diǎn)。使用這種方法，我們能擴(kuò)增 4005000bp 的片段， 這些產(chǎn)物進(jìn)瓊脂糖凝膠純化，用 pGEMT 試劑盒克隆，并測序。 結(jié)果 堅(jiān) 定了來自水稻低拷貝數(shù)量的候選基因 來自 2 號(hào)染色體的 64kb 染色體片段與小麥 的 GpcB1 區(qū)域呈共線性 (Distelfeldet al., 2020),包括 11 個(gè)推測的基因，其中 4 個(gè)在 TREP 數(shù)據(jù)庫或 TIGR 數(shù)據(jù)庫未知轉(zhuǎn)座子元件有重要相似性，其中的 2 個(gè)與別的蛋白或是植物中的任何 EST 無重大的相關(guān)性。通過 (Table 1).揭示了五種水稻和小麥的重要相似性。設(shè)計(jì)的基因引物成功的擴(kuò)增出了來自 LDN 的基因 DNA 的 4 個(gè) ESTs。 4 個(gè) ESTs 的 PCR產(chǎn)物作為探針 ,在 southern 印跡法中雜交用限制性內(nèi)切酶消化的雙親型 DNA。 EST BQ609014 雜交結(jié)果出現(xiàn)多條帶表明該基因是一個(gè)多基因家族，而其余三個(gè) ESTs 出現(xiàn)一條帶或兩條帶，表明是單拷貝或是多拷貝基因。盡管大量的限制性內(nèi)切酶被篩選，在雙親線中沒有發(fā)現(xiàn)多態(tài)性。因此， PCR 標(biāo)記比ESTs 標(biāo)記更成熟。 PCR 標(biāo)記在 BQ789353, BE444066 和 AL826407 中的應(yīng)用 BQ789353 引物擴(kuò)增出 466bp 產(chǎn)物， 通過 466bp UHW83 探針發(fā)現(xiàn)了 8 個(gè)確定的 BAC 克隆，只有一 個(gè)屬于 B 基因組。 用 HindIII 酶切包含 BAC 的 BAC 770E02 出一個(gè) 5500kb 的片段，并測序。通過 CAPS標(biāo)記找到了一個(gè)單核苷酸多態(tài)性 SNP。用限制新內(nèi)切酶 HaeIII得到 LDN(DIC6B)的 307bp和 106bp 片段， LDN 的 413bp 片段。這種多態(tài)性被用于 Xuhw83 作圖。 BE444066 按（表 1）使用設(shè)計(jì)的引物從 LDN 從得到了 750bp 片段，用限制性酶 StyI酶切 DIC 得到 432bp 和 117bp 片段， StyI 酶切 LDN 得到 549bp 片段，這些與 GpcB1 位點(diǎn)重要聯(lián)系多態(tài)性被用于 Xuhw83 作圖。 AL826407 使用 HindIII 消化 AL826407
公司管理相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1