【文章內容簡介】 染色質結構的第二層次 a、組成 Nuclear matrix (核基質 ), protein plex 30 nm fiber 300 nm b、體內存在狀態(tài) 從 DNA到染色體的過程 Compaction ratio = 8000 Centromere 著絲粒 Telomere 有絲分裂中期的染色體 姊妹染色單體 Nuclear matrix 核基質 30nm 纖絲環(huán) Chromatid 染色單體 著絲粒（ centromere 或中心粒 ) 和端粒 (telomere) （ 1）著絲粒 ( centromere) Yeast centromere 富含 AT,兩側有高度重復的 衛(wèi)星 DNA,屬異染色質區(qū) a、真核染色體線性 DNA末端的特殊 DNA序列 b、有數百個拷貝的 短的正向重復序列 ,且總是 3’端富含 G 如：人體內 5’TTAGGG3’ c、復制靠端粒酶（ telomerase 核蛋白 )來完成 ，不同于正常 DNA的復制 d、端粒 DNA形成 特殊的二級結構 （ G四聯體形成四鏈結構）以使染色體末端免遭降解 （ 2） 端粒 (Telomere ) 第四節(jié) 真核生物的基因 一、真核生物 DNA的復性動力學 (重新結合動力學 Reassociation kiics） 基因組 DNA的提取 ? 超聲處理或剪切到一定的長度 (x 1001000 bp) ? 溫度變性 ? 退火（ Reannealing） 測量并捕捉退火過程得出復性動力學曲線 C／ C0＝ 1／（ 1＋ kC0t） (紫外吸收法、羥基磷灰石柱層析法 ) ● 真核生物復性動力學研究 復雜性 形狀相似 （ 跨越 1～ 2個數量級 ） ， Cot（ 1／ 2） 不相同 －－單一序列 只是復雜性不同 復性動力學復雜性 kiic plexity(.) 單一排列序列 Cot(1/2)值大 高度重復序列 Cot(1/2)值小 poly(A) .=1 Cot(1/2)=2x106 T4 .= Cot(1/2)= of any genome DNA Kiic Complexity of Kiic Complexity of . 與 Cot(1/2)值呈正比 復性曲線的模式圖 ● 真核生物復性動力 學研究 復性反應分為三相， 每相代表不同復雜長 度的序列類型 C0t(1/2) 值矯正 25% = 30% = 45% 630 = 283 如果同樣條件下：把每一個組分單獨提取作復性試驗，有一個 C0t(1/2) 值矯正， 因混合組分復性時，該組份 C值為 C0 X 百分數 則各種復性組分的復雜性可以計算出：慢復性組分 ／往往假定慢復性組分為單一序列即重復頻率（ Repetitive frequency ）所以，快復性組分和中間復性組分的 f 值可以計算得到 340， 105， 350● 真核生物復性動力學研究發(fā)現了重復序列 而 = Genome DNA總長度 該組份所占的比例 該組份的動力學復雜性（ .） 即反推 Genome DNA總長度 ＝（ f .）／該組份所占比例 （近似值） ＝（ 1 108）／ 45％ ＝ 108 二、 DNA的序列類型 高度重復序列（ Highly repetitive sequence） 長度 2 ～ 10bp，重復數以百萬次 106 許多富含 AT高度重復序列可以用密度梯度離心法分離出來 無液泡的小孢子 小液泡的小孢子 單核花粉期的小孢子 不同發(fā)育時期花粉制備 衛(wèi)星 DNA（ Satellite DNA）： 將 DNA切成數百個堿基對的片 段進行超速離心時，由于富含 AT的簡單高度重復序 列區(qū)段浮力密度較小，因而很容易和總體 DNA分開， 即常會在主要的 DNA帶的上面有一個次要的帶相伴隨 Mouse genome DNA ?30% GC in satellite DNA CsCl 離心 ACAAACT, 拷貝 , 衛(wèi)星 Ⅰ 25% genome ATAAACT, 拷貝 , 衛(wèi)星 Ⅱ 8% genome ACAAATT, 拷貝 , 衛(wèi)星 Ⅲ 8% genome Satellites prise more than 40% of the genome a、 分布于 著絲點 , 端粒區(qū) （ 原位雜交 ） , 結構基因兩側 （ 根據重復頻率和大小又可分為衛(wèi)星 、 小衛(wèi)星和微衛(wèi)星 DNA） b、往往沒有功能，（著絲粒 紡錘體） 果蠅（ Drosophila） 衛(wèi)星 DNA n 5’ – ATAAACTATAAACTATAAACT – 3’ 3’ – TATTTGATATTTGATATTTGA – 5’ 人類和其他動物中：短的串聯重復 550 copies / genome 而且有共同的核心序列 ， 但同一群體中重復次數變動很 大 ， 個體間長度變化很大 ， 可利用其得到 DNA指紋圖 （ DNA finger printing） ☆ 數目可變的串聯重復或小衛(wèi)星 ( Variable number tandem repeats . VNTR ) 限制性酶切某一個體 DNA 電泳 用制得的小衛(wèi)星探 針與之雜交 顯示出許多長短不等的帶 目前在法醫(yī)上得到了廣泛的應用 其中大部分衛(wèi)星 DNA的重復片段之間序列上是有差異的 以下及下一頁不講 上節(jié)課內容回顧： 組蛋白： 組分 八聚體形成 核小體 核心顆粒： 146bp 每個核小體顆粒的組成 30nm纖絲 組成 存在狀態(tài) 從 DNA到染色質 著絲粒、端粒 真核生物的復性動力學 C0t1／ 2之比等于復雜性之比 單一序列、重復序列 基因組大小計算 每一組分復雜性、重復頻率計算 DNA的序列類型：高度重復序列 衛(wèi)星 DNA