dna結(jié)構(gòu)-第二章dna的結(jié)構(gòu)(編輯修改稿)
2025-02-15 00:42 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 osis amp。 mitosis 有關(guān) Hoogsteen Bonding 5’TTAGGGTTAGGGTTAGGGT 3’AATCCCAATCCC GGG T A 第四節(jié) DNA的物理、化學(xué)性質(zhì) DNA雙股鏈的互補(bǔ) 是其結(jié)構(gòu)和功能上的一個(gè)基本特征 也是 DNA研究中一些實(shí)驗(yàn)技術(shù)的基礎(chǔ) 一、 DNA分子的變性 變性 （ denaturation 或融解 melting） ： DNA雙螺旋區(qū)的 氫鍵斷裂 ， 使雙螺旋的兩條鏈完全分開變成單鏈 ， 這 一雙鏈分離的過程叫做變性 條件：加熱 , 極端 pH,有機(jī)溶劑（ 尿素、 酰胺 )，低鹽濃度等 變性過程的表現(xiàn) 164。 是一個(gè)爆發(fā)式的協(xié)同過程 ， 變性作用發(fā)生在一個(gè)很 窄的溫度范圍 164。 導(dǎo)致一些理化性質(zhì)發(fā)生劇烈變化 表現(xiàn)為： ※ 熔液黏度降低 ※ 沉降速度加大 ※ 浮力密度上升 ※ 此外吸收值升高 （ A260nm） ， 即 增色效應(yīng) 指在 DNA變性的過程中 ， 他在 260nm的吸收值先是緩慢 上升 ， 達(dá)到某一溫度時(shí)及驟然上升 天然 DNA和變性 DNA的吸收值相差可達(dá) 34％ DNA A260 = DNA A260 = dNTPs A260 = 當(dāng)濃度為 50μg/ml時(shí)： OD ℃ Tm = OD增加值的中點(diǎn)溫度 (一般為 8595℃ ) 或 DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)失去一半時(shí)的溫度 熔解曲線與 融解溫度 (Tm值 ) 緩慢而均勻地增加 DNA 溶液的溫度（現(xiàn)可做到 ℃ ／分 ）可根據(jù)各 點(diǎn)的 A260值繪制成 DNA 的熔解曲線 這也是一般 PCR實(shí)驗(yàn)技術(shù)中把變性溫度定為 94 ℃ 的原因 影響 Tm值的因素 （ 1） 在 A, T, C, G 隨機(jī)分布的情況下 ，決定于 GC含量 （ 2） GC%含量相同的情況下 GC%愈高 → Tm值愈大 GC%愈低 → Tm 值愈小 AT形成變性核心，變性加快， Tm 值小 堿基排列對(duì) Tm值具有明顯影響 5` GC 3` CG n ＞＞ 5` CG 3` GC n 5` TA 3` AT n ＜＜ 5` AT 3` TA n ℃ ℃ Tm ℃ ℃ ※ 嘌呤嘧啶的排列順序?qū)﹄p螺旋結(jié)構(gòu) （ 穩(wěn)定性 ） 的影響 即－－ 氫鍵數(shù)目相同 ， 但相鄰堿基的堆積力不同 從嘌呤到嘧啶方向的堿基堆積力作用顯著地大于同樣組成的嘧啶到嘌呤方向的堿基堆積作用 PyrimidinePurine Steps Have Little Base Stacking 5’ 3’ 3’ 5’ C G A T 5’ CA 3’ 3’ GT 5’ PurinePyrimidine Steps Have Extensive Base Stacking 5’ 3’ 3’ C A T G 5’ 5’ AC 3’ 3’ TG 5’ ? 生物體內(nèi)僅 UAA為最有效的終止密碼子 因?yàn)椋? UAA AUU 的 Tm值是最低的一個(gè) ， 即使生 理溫度下也不穩(wěn)定 （ 3） 大片段 DNA分子之間比較 片段長(zhǎng)短對(duì) Tm值的影響較小 , 與組成和排列相關(guān) （ 4） 小于 100bp 的 DNA分子比較 片段愈短， 變性愈快， Tm值愈小 （ 5） 變性液中含有尿素，甲酰胺等 尿素，甲酰胺與堿基間形成氫鍵 改變堿基對(duì)間的氫鍵 Tm 值可降至 40℃ 左右 （ 6） 鹽濃度的影響 每升 Na+是常用的標(biāo)準(zhǔn)條件 思考題：室溫下蒸餾水中的 DNA會(huì)如何？ pH ~ 12 酮基 → 烯醇基 pH ~ 23 NH2 → NH 2+ (質(zhì)子化 ) 改變氫鍵的形成與結(jié)合力 （ 7） 極端 pH條件的影響 一切減弱氫鍵， 堿基堆積力的因素 均將使 Tm 值降低
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