【文章內(nèi)容簡介】 室種植。n 也可去插條在室內(nèi)溶液培養(yǎng)。也可去插條在室內(nèi)溶液培養(yǎng)。n 定期噴施殺菌劑（如鏈霉素）也有效。定期噴施殺菌劑（如鏈霉素）也有效。 莖尖剝離莖尖剝離①① 取幼苗莖尖取幼苗莖尖 2～～ 3cm小段，剝?nèi)タ梢姷拇笕~，自來水沖洗小段，剝?nèi)タ梢姷拇笕~，自來水沖洗 1h左右后進入無菌室。左右后進入無菌室。②② 先用先用 95%酒精快速浸泡一下，再放入酒精快速浸泡一下，再放入 5%漂白粉消毒漂白粉消毒 7～～10min（或（或 5%次氯酸鈉溶液），然后無菌水沖洗次氯酸鈉溶液），然后無菌水沖洗 3～～ 4次，次，③③ 在在 雙筒解剖雙筒解剖 下剝?nèi)ビ兹~，露出圓滑的生長點，用解剖針切下剝?nèi)ビ兹~，露出圓滑的生長點，用解剖針切取帶取帶 1～～ 2個葉原基的生長點，接種到培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)。個葉原基的生長點，接種到培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)。④④ 這種外植體（生長錐帶這種外植體（生長錐帶 1～～ 2個原葉基）的培養(yǎng)，嚴格來說個原葉基）的培養(yǎng)，嚴格來說，應稱為，應稱為 分生組織培養(yǎng)分生組織培養(yǎng) 。取 23㎝ 頂梢 莖尖培養(yǎng)莖尖培養(yǎng)n 常用常用 MS（雙子葉）、（雙子葉）、 B5和和 N6（（ 單子葉）和單子葉）和 White（生根）培養(yǎng)基，較高濃度的無機鹽（生根）培養(yǎng)基，較高濃度的無機鹽 ，對促進組，對促進組織分化和愈傷組織生長是有利的?？椃只陀鷤M織生長是有利的。n 可添加可添加 5%～～ 10%椰乳，椰乳， ～～ 、萘乙酸、芐基腺嘌呤等，有的還需添加活性炭、萘乙酸、芐基腺嘌呤等，有的還需添加活性炭。n 根據(jù)培養(yǎng)種類不同，添加的生長調(diào)節(jié)劑可適當調(diào)根據(jù)培養(yǎng)種類不同，添加的生長調(diào)節(jié)劑可適當調(diào)整。整。 繼代培養(yǎng)生根和快速繁殖繼代培養(yǎng)生根和快速繁殖n 將接種外植體置于將接種外植體置于 25度左右、光照度度左右、光照度3000lx的實驗室中，光周期的實驗室中，光周期 1316h/d，培，培養(yǎng)養(yǎng) 23周成苗。苗高周成苗。苗高 12cm高時，轉入生根高時，轉入生根培養(yǎng)基，培養(yǎng)基， 710天后生根，再繼代成壯苗后天后生根，再繼代成壯苗后移栽。移栽。圖圖 71 葡萄莖尖脫毒培養(yǎng)過程示意圖葡萄莖尖脫毒培養(yǎng)過程示意圖葡萄莖尖脫毒經(jīng)過葡萄莖尖脫毒經(jīng)過 7個時期：個時期： A―接種后變綠增大期；接種后變綠增大期； B―形成畸形葉期；形成畸形葉期；C―形成多芽和芽伸長期；形成多芽和芽伸長期； D―多芽展開小葉和小葉伸長期；多芽展開小葉和小葉伸長期； E―發(fā)根發(fā)根期；期； F―根和莖伸長期；根和莖伸長期； G―移栽入盆期移栽入盆期 影響莖尖培養(yǎng)法脫除植物病毒的因素影響莖尖培養(yǎng)法脫除植物病毒的因素? 母體材料病毒侵染的程度? 外植體的生理狀態(tài)? 起始培養(yǎng)的莖尖大小? 培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件n 莖尖培養(yǎng)脫毒效果的好壞與莖尖大小呈負相關，切取的莖尖越小，脫毒效果越好； 而培養(yǎng)莖尖成活率的高低則與莖尖大小呈正相關，切取莖尖越小，成活率越低。 一般剝離帶 12個葉原基的莖尖即可獲得較好的脫毒效果。n 莖尖越小對培養(yǎng)基的要求越高，成功率越低。 一般生長素 /細胞分裂素的比值大于 1時有利于根的形成，否則有利于芽的分化。康乃馨不同大小莖尖與康乃馨斑駁病毒的脫毒效果莖尖大小(mm)培養(yǎng)數(shù)荊 芥 鑒 定之病斑總 病斑 接種葉數(shù) 平均病斑數(shù) /葉無病毒莖尖 數(shù)目 % 3 20 30 9 4 5 3 13 137 61 1198 70 429 12 432 11 1972 20 2 66 8 40 4 13 1 11 0 0 0 0 提高脫毒效果提高脫毒效果 物理處理物理處理1）高溫處理）高溫處理2）低溫處理）低溫處理 化學處理化學處理1）高溫處理又稱溫熱療法）高溫處理又稱溫熱療法n 某些病毒受熱以后不穩(wěn)定，失去活性。某些病毒受熱以后不穩(wěn)定，失去活性。n 把植物放在高于正常溫度的環(huán)境中，組織把植物放在高于正常溫度的環(huán)境中，組織內(nèi)部的病毒受熱后部分或全部鈍化，使病內(nèi)部的病毒受熱后部分或全部鈍化，使病毒在植物體內(nèi)增殖減緩或停止，而失去侵毒在植物體內(nèi)增殖減緩或停止，而失去侵染能力；但寄主植物的組織很少或不會受染能力；但寄主植物的組織很少或不會受到傷害。到傷害。n 作為一種物理效應可以加速植物細胞的分裂，使植物細胞在與病毒繁殖的競爭中取勝。熱處理時間因植物而異熱處理時間因植物而異（（ 1）溫湯浸漬處理）溫湯浸漬處理 適用于休眠器官、適用于休眠器官、 剪下的接穗或種植的材料，在剪下的接穗或種植的材料，在 50℃℃ 左右左右的溫水中浸漬材料數(shù)分鐘至數(shù)小時，的溫水中浸漬材料數(shù)分鐘至數(shù)小時，方法簡便易行但易致材料受傷。方法簡便易行但易致材料受傷。（（ 2）熱風處理）熱風處理 將試驗母株在高溫室內(nèi)或生長箱中將試驗母株在高溫室內(nèi)或生長箱中生長一個階段，使其頂端分生組織和次生分生組生長一個階段，使其頂端分生組織和次生分生組織迅速生長，然后切取其莖尖分生組織進行離體織迅速生長，然后切取其莖尖分生組織進行離體培養(yǎng)。對活躍生長的莖尖效果較好。培養(yǎng)。對活躍生長的莖尖效果較好。 處理溫度和時間因植物種類和器官生理狀況而異處理溫度和時間因植物種類和器官生理狀況而異。n 培養(yǎng)溫度（培養(yǎng)溫度（ 35℃℃ ~40℃℃ ））n 光照強度（光照強度（ 3000~10000Lx)n 培養(yǎng)時間培養(yǎng)時間 短則幾十分鐘，長可達數(shù)月短則幾十分鐘，長可達數(shù)月n 例如康乃馨置于例如康乃馨置于 38℃℃ 兩個月，草莓兩個月，草莓 36℃℃ 6周，即周，即可清除莖尖的病毒?？汕宄o尖的病毒。n 如馬鈴薯未脫毒小苗在生長箱中如馬鈴薯未脫毒小苗在生長箱中 變溫處理變溫處理 ，35℃℃ 4h， 31℃℃ 4h，交替，交替 1個月，其脫毒效果可達個月，其脫毒效果可達80%以上。以上。n 變溫處理變溫處理 的優(yōu)點：的優(yōu)點： 35℃℃ 使病毒鈍化，使病毒鈍化， 31℃℃ 可提高可提高小苗生活力，這樣既提高脫毒率，又能提高成苗小苗生活力，這樣既提高脫毒率，又能提高成苗率。率。熱處理的局限性（ 1） 并非所有的病毒都對熱處理敏感 。熱處理只對圓周形（蘋果花葉病毒）、線狀（馬鈴薯卷葉病毒）的病毒和類菌質體起作用。而對桿狀病毒（千日紅病毒）無效。（ 2）延長熱處理時間，病毒鈍化效果好，同時也可能會 鈍化 植物組織中的 抗性因子 而降低處理效果。（ 3）熱處理極易使植物材料受熱枯死，處理后只有一小部分植株能夠 存活 ，造成損失。 香石竹（康乃馨）在 38℃ ～ 40℃ 下經(jīng)兩個月處理可除去全部病毒。 馬鈴薯在 37℃ 下處理 10～ 20天能除去卷葉病毒。 提高脫毒效果提高脫毒效果 物理處理物理處理1）高溫處理）高溫處理2）低溫處理）低溫處理 化學處理化學處理2）低溫處理，亦稱冷療法。）低溫處理，亦稱冷療法。n 菊花植株在菊花植株在 5℃℃ 條條 件下分別處理件下分別處理 4個月個月 或或 月，月，n 沒有菊花矮化病毒（沒有菊花矮化病毒（ CSV）的無病毒苗分別是）的無病毒苗分別是 67%和和 73%，n 沒有菊花褪綠斑駁病毒（沒有菊花褪綠斑駁病毒（ CCMV）的無病毒苗分）的無病毒苗分別是別是 22%和和 49%，n 未經(jīng)處理的莖尖則無脫毒效果。未經(jīng)處理的莖尖則無脫毒效果。 化學處理，又稱化學療法。化學處理，又稱化學療法。n 一些化學藥品如一些化學藥品如 嘌呤和嘧啶類似物、氨基酸、抗嘌呤和嘧啶類似物、氨基酸、抗生素生素 處理，可在某種程度上抑制植物體內(nèi)或離體處理，可在某種程度上抑制植物體內(nèi)或離體葉片內(nèi)病毒的合成，但仍不能使病毒失活。葉片內(nèi)病毒的合成，但仍不能使病毒失活。n 三氮唑核苷三氮唑核苷 用于防治一系列動物用于防治一系列動物 DNA和和 RNA病毒病毒，對植物也有效。，對植物也有效。表表 74 煙草外植體在三氮唑核苷條件下培養(yǎng)脫煙