細胞生物反應器制藥(編輯修改稿)
2025-02-14 02:29 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 ES進行克隆，可培育轉基因個體。在小鼠上應用成熟，大動物較晚。從豬胚胎中獲得了干細胞克隆系1988，牛的胚胎干細胞 1990。建立大家畜 ES細胞系仍很困難，但隨著一些相關關鍵技術的成熟，ES細胞介導法將會在轉基因動物的研究中起到更加重要的作用 精子載體法 直接用精子作為外源 DNA載體的基因轉移方法。精子直接與外源 DNA混合培養(yǎng)，外源基因可以進入精子頭部，受精后能發(fā)育成轉基因動物，其整合率低（雞為 %），但表達率高達 50%。 許多因素影響 DNA與精子結合。較長的 DNA片段比較短的 DNA片段（ 150～ 750dp）更容易被精子所攝取。對精子和附睪精子的清洗可提高精子與 DNA的結合率。目前已采用陽離子脂質(zhì)體介導法，脂質(zhì)體借靜電作用吸附于細胞表面，通過與細胞膜融合，細胞內(nèi)吞而將結合的基因導入細胞。 受精前卵細胞顯微注射法 Anthony等（ 1999）嘗試一種新方法：預先將小鼠精子進行破膜處理，與編碼綠色熒光蛋白 GFP報告分子的外源 DNA短時間（ 1min）共孵育，然后徽注射入減數(shù)分裂 II期的卵母細胞質(zhì)中，取得 64%～ 94%轉基因表達胚胎。將轉 GFP的胚胎移植， 20%的后代表現(xiàn)為基因整合。 此項研究揭示，精子膜經(jīng)冷凍干燥或解凍處理后，外源 DNA可穿過外膜，吸附于內(nèi)膜。因此外源 DNA能通過精子的徽注射有效轉入卵母細胞，經(jīng)膜處理的攜外源 DNA精子的徽注射是一種有效的轉基因手段。 2022/2/13 細胞工程 22 四種方法比較 方法 顯微注射 胚胎干細胞 逆轉錄病毒 精子介導 優(yōu)點 外源基因整合效率較高，不需要載體，目的基因的長度可達 100Kb 外源 DNA的整合率高； 整合在生殖細胞中的比例也很高。 可在整合點整合轉移基因的單個拷貝； 該方法簡單、方便 缺點 精密儀器， 技術操作較難，易造成宿主動物基因組的插入突變 ES細胞株不易建立，長期培養(yǎng)后出現(xiàn)分化現(xiàn)象；生產(chǎn)的轉基因動物都是嵌合體 插入的基因有大小限度；嵌合性很高；外源 DNA 在動物各種組織中的分布不均 有些結果不能重復 酵母人工染色體 (YAC)載體是近年發(fā)展起來的新型載體 , 它能克隆百萬對堿基的大片段 DNA。 作為制作轉基因動物載體具有以下 優(yōu)點： A. 保證大片段 DNA的完整性 B. 提高較長外源片段在動物轉基因時的整合率 C. 保證目的基因上下游的側翼序列的完整性，因而可以消除或減弱基因整合后的位置效應 .因此， YAC介導法制備轉基因動物具有廣闊的應用前景 酵母人工染色體 (YAC)法 一般把目的片段在器官或組織中表達的轉基因動物叫動物生物反應器 （ bioreactor）， 幾乎任何有生命的器官、組織或其中一部分都可經(jīng)過人為馴化為生物反應器 ,從生產(chǎn)的角度考慮，生物反應器選擇的組織和器官要方便產(chǎn)物的獲得，例如，乳腺、膀胱、血液等，由此發(fā)展了動物乳腺生物反應器 ,動物血液生物反應器和動物膀胱生物反應器等。其中，轉基因動物乳腺生物
環(huán)評公示相關推薦
鄂ICP備17016276號-1