hbsag免疫對小鼠t、b細胞功能的影響(2)(編輯修改稿)
2025-02-08 08:05 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 2個 /room 14. 超凈臺 2個 /room ? 動物及試劑 1. 小鼠 2只 /組 (NS,OVA) 2. 培養(yǎng)液 （ IMDM) 無 FCS 100ml/room 3. 培養(yǎng)液 （ IMDM)20%FCS 30ml/room 4. ConA（ ,5,10181。g/ml) 各 5. 白細胞計數(shù)液 （ 2%冰醋酸 ） 2瓶 /room 6. MTT（ 5mg/ml) 7. 二甲亞砜 （ DMSO) 5ml/組 分組： 每組四人，兩人一只小鼠，其中一人胸腺，一人脾臟 免疫血清分離過程 摘眼球取血 RT for 2hrs Rotation 2022rpm for 20min Transfer serum to a new EP Double diffusion Store at 4℃ ELISA EP 淋巴細胞轉(zhuǎn)化實驗步驟 ? 單細胞懸液的制備： 1. 小鼠脫臼處死 ， 用酒精棉球擦拭皮毛消毒 。 2. 于超凈臺內(nèi)取出脾和胸腺組織 (各 1/2)， 分別放入預(yù)先盛有 2ml IMDM培養(yǎng)液的平皿內(nèi) 。 3. 將 34層紗布覆蓋到組織上 ， 用直頭鑷子固定組織 ， 用彎頭鑷子輕壓組織 ， 將其搗碎 。 然后用 1000181。l加樣器隔著紗布將細胞懸液吸出 ， 放入 EP管中 。 ? 細胞計數(shù)： 1. 取上述制備好的細胞懸液混勻后取出 20181。l， 加到盛有 980181。l計數(shù)液的 EP管中 ， 在顯微鏡下計數(shù) ， 計數(shù)方法見后 。 2. 調(diào)細胞濃度至 1 107/ml， 所需量為 ， 設(shè)需要的細胞懸液體積為 Aml,可按公式： ?/ml A= 1 107 NOTE:在稀釋前一定將原細胞懸液混勻 ， 否則細胞長時間沉淀使細胞數(shù)不準(zhǔn) 。 細胞計數(shù)板 ? 查出四個大方格的總細胞數(shù) (X) ? 算出每個大方格的細胞數(shù)： Y=X/4 ? 每個大方格的體積為 V=1mm 1mm ==104ml ? 制備的細胞懸液的細胞濃度 （ /ml)=Y 104 稀釋倍數(shù) (50)
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