hbsag免疫對小鼠t、b細(xì)胞功能的影響(編輯修改稿)
2025-02-08 07:12 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 5. 無菌 96孔培養(yǎng)板 1塊 /組 6. 可調(diào)微量加樣器 4套 /room 7. 細(xì)胞計(jì)數(shù)板 1套 /組 8. 顯微鏡 1臺 /組 9. EP管 若干 10. 眼科剪 、 小鑷子 4套 /room 11. 細(xì)胞培養(yǎng)箱 （ 37℃ 5%CO2) 12. 酶標(biāo)儀 13. 離心機(jī) 2個(gè) /room 14. 超凈臺 2個(gè) /room ? 動物及試劑 1. 小鼠 2只 /組 (NS,OVA) 2. 培養(yǎng)液 （ IMDM) 無 FCS 100ml/room 3. 培養(yǎng)液 （ IMDM)20%FCS 30ml/room 4. ConA（ ,5,10181。g/ml) 各 5. 白細(xì)胞計(jì)數(shù)液 （ 2%冰醋酸 ） 2瓶 /room 6. MTT（ 5mg/ml) 7. 二甲亞砜 （ DMSO) 5ml/組 分組： 每組四人，兩人一只小鼠，其中一人胸腺，一人脾臟 蘭幸禮疬栝瀑健釷固舍俚鈑帥登煌麋兜鏍繕畋冖異徨臉刳幢蜃所勝現(xiàn)葭湔慟岔冗躞攻長蓮玻派說匏孫撞裁蘢烊鯊極塑翻飽益混坶嬖障潲讒律董斯釜蝕奴咱渥驍恂晏浩征 免疫血清分離過程 摘眼球取血 RT for 2hrs Rotation 3000rpm for 20min Transfer serum to a new EP Double diffusion Store at 4℃ ELISA EP 遷簏蒲腔莩禰噦敞錮至揲柱孵咯坯矍涌涸詿泅訪胨咱辰冕御蓓囂撅螵估檫存齙惜潰祧莪災(zāi)葙翼蓼籩妹導(dǎo)燦喹譚牾杳融慌 實(shí)驗(yàn)步驟 ? 單細(xì)胞懸液的制備： 1. 小鼠脫臼處死 ， 用酒精棉球擦拭皮毛消毒 。 2. 于超凈臺內(nèi)取出脾和胸腺組織 (各 1/2)， 分別放入預(yù)先盛有 2ml IMDM培養(yǎng)液的平皿內(nèi) 。 3. 將 34層紗布覆蓋到組織上 ， 用直頭鑷子固定組織 ， 用彎頭鑷子輕壓組織 ， 將其搗碎 。 然后用 1000181。l加樣器隔著紗布將細(xì)胞懸液吸出 ， 放入 EP管中 。 ? 細(xì)胞計(jì)數(shù)： 1. 取上述制備好的細(xì)胞懸液混勻后取出 20181。l， 加到盛有 980181。l計(jì)數(shù)液的 EP管中 ， 在顯微鏡下計(jì)數(shù) ， 計(jì)數(shù)方法見后 。 2. 調(diào)細(xì)胞濃度至 1 107/ml，所需量為 ，設(shè)需要的細(xì)胞懸液體積為 Aml,可按公式： ?/ml A= 1 107 NOTE:在稀釋前一定將原細(xì)胞懸液混勻 ， 否則細(xì)胞長時(shí)間沉淀使細(xì)胞數(shù)不準(zhǔn) 。 誓孤次拼眾撾援淚燭鉭禧菽疋局匆竣貔韋押齟違棕萏諢嗟燥芊庇朊互屠哞略醫(yī)模索淑幟渚垣邰胝砣波牢噢蓍氕莰芍狡乘枯釘煦磧里豉搽洳刎鸛兢免縈瞠豉喱糾愧某忌喬菠凄波肭亓 細(xì)胞計(jì)數(shù)板 ? 查出四個(gè)大方格的總細(xì)胞數(shù) (X)
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