生物技術在植物病理學中的應用(編輯修改稿)
2025-02-04 02:25 本頁面
【文章內容簡介】 ? 細菌細胞抗原的制備 單克隆抗體技術 抗原制備 ? 可溶性抗原制備 ① 離心分離法 ② 鹽析法 ③ 分子篩效應 ④ 離子交換色譜 單克隆抗體技術 抗原制備 ? 半抗原免疫原的制備 ? 多糖、多肽、甾體激素、脂肪酸、類脂質、核苷酸、藥物（包括抗生素）以及其他化學物品 ? 載體有蛋白質類，多肽聚合物，大分子聚合物和某些顆粒。常用的蛋白有BSA,HSA,多肽有多聚賴氨酸（ polyLlysine） 青霉素半抗原的制備 單克隆抗體技術 動物免疫 ? 顆粒性抗原免疫性較強，不加佐劑就可獲得很好的免疫效果。 初次免疫 1 10７ ／ (腹腔內注射 ) ↓ 23周后 第二次免疫 1 10７ ／ (腹腔內注射 ) ↓ 3周后 加強免疫 (融合前三天 )1 10７ ／ ip或 iv(靜脈內注射 ) ↓ 取脾細胞融合 單克隆抗體技術 動物免疫 ? 可溶性抗原免疫原性弱，一般要加佐劑，常用佐劑為福氏完全佐劑和福氏不完全佐劑。 初次免疫 Ag 150μ g 加福氏完全佐劑皮下多點注射 │ (一般 ／點 ) ↓ 3周后 第二次免疫 劑量同上，加福氏不完全佐劑皮下或 ip │ (ip劑量不宜超過 ) ↓ 3周后 第三次免疫 劑量同上，不加佐劑， ip │ (57天后采血測其效價，檢測免疫效果 ) ↓ 23周后 加強免疫，劑量 50500μ g為宜， ip或 iv ↓ 3天后 取脾細胞融合 ①將可溶性抗原顆粒化或固相化，增強了抗原的免疫原性，同時降低抗原的使用量。②直接采用脾內注射。③使用細胞因子作為佐劑，提高機體的免疫應答水平。 單克隆抗體技術 細胞融合 ? 將骨髓瘤細胞與脾細胞按 1∶10 或 1∶5 的比例混合在一起，用不完全培養(yǎng)液洗 1次， 1200rpm離心 8分鐘。 ? 棄上清，用滴管吸凈殘留液體，以免影響 PEG的濃度。 ? 輕輕彈擊離心管底，使細胞沉淀略加松動。 ? 在室溫下融合 : ?30秒內加入預熱的 1ml45％ PEG4000,含 5％ DMSO，邊加邊攪拌。 ? 作用 90秒鐘，若冬天室溫較低時可延長至 120秒鐘。 ? 加預熱的不完全培養(yǎng)液，終止 PEG作用，每隔２分鐘分別加入 1ml， 2ml， 3ml， 4ml， 5ml和 10ml。 ? 離心， 800rpm， 6分鐘。 ? 棄上清，先用 6ml左右 20％小牛血清 RPMI1640輕輕混懸，切記不能用力吹打，以免使融合在一起的細胞散開。 ? 根據(jù)所用 96孔培養(yǎng)板的數(shù)量，補加完全培養(yǎng)液， 10ml一塊 96孔板。 ? 將融合后細胞懸液加入含有飼養(yǎng)細胞的 96孔板， 100μl ／孔，37℃ 、 5％ CO2孵箱培養(yǎng)。 單克隆抗體技術 選擇
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