【文章內(nèi)容簡介】
附( adsorption) 尾絲尖端與宿主細胞表面的 特異性受體 接觸,可觸發(fā)尾絲散開,附著在受體上,隨之把刺突、基板固定。 20220216 Yang SY 分別吸附于大腸桿菌性毛和菌體上的噬菌體 20220216 Yang SY 20220216 Yang SY 侵入 又稱 病毒內(nèi)化 ,它是一個病毒吸附后幾乎立即發(fā)生, 依賴于能量的感染步驟 。 侵入( peration) 不同的病毒-宿主系統(tǒng)的病毒侵入機制不同 20220216 Yang SY 噬菌體:采用 注射方式將噬菌體核酸注入細胞 20220216 Yang SY 噬菌體尾部的酶水解細胞壁的肽聚糖,使細胞壁產(chǎn)生小孔;尾鞘收縮,核酸通過中空的尾管壓入胞內(nèi),蛋白質(zhì)外殼留在胞外。 DNA注入 20220216 Yang SY 病毒基因組的表達與復制存在著強烈的時序性 病毒基因組進入胞內(nèi) 宿主細胞的代謝發(fā)生改變 病毒利用宿主的生物合成機構和場所,使病毒核酸表達和復制,產(chǎn)生大量的病毒蛋白質(zhì)和核酸。 增殖( replication) 20220216 Yang SY 早期( early, immediate early) 轉錄與轉譯出早期蛋白,即只能轉錄噬菌體的次早期 mRNA聚合酶。 次早期( delayed early) 轉錄與轉譯出次早期蛋白,如裂解宿主 DNA的DNA酶,復制噬菌體的 DNA聚合酶等。 晚期( late) 轉錄與轉譯出晚期蛋白,包括噬菌體的頭部蛋白、尾部蛋白、各種裝配蛋白、溶菌酶等。 20220216 Yang SY 早期( early, immediate early) 次早期( delayed early) 晚期( late) 20220216 Yang SY 新合成的毒粒結構組分組裝成完整的病毒顆粒的過程稱為 成熟 ( maturation) , 亦稱做病毒的 裝配 。 成熟( maturation) 20220216 Yang SY DNA分子的縮合 通過衣殼包裹 DNA而形成頭部 尾絲和尾部的其他部件獨立裝配完成 頭部與尾部相結合 最后裝上尾絲 主要步驟有: 20220216 Yang SY ? 噬菌體增殖、成熟過程 20220216 Yang SY 裂解( lysis) 當宿主細胞內(nèi)的大量子代噬菌體已成熟后,由于水解細胞膜的 脂肪酶 和水解細胞壁的 溶菌酶 的作用,從細胞內(nèi)部促進了細胞的裂解,從而實現(xiàn)了噬菌體的釋放。 20220216 Yang SY 20220216 Yang SY 20220216 Yang SY 效價: 表示每毫升試樣中所含有的具侵染性的噬菌體粒子數(shù),又稱噬菌斑形成單位( pfu) 或感染中心數(shù)。 測定的方法 —— 雙層平板法 用雙層平板法測出的效價比用電鏡直接記數(shù)得到的效價低。 前者是計 有感染力 的噬菌體粒子,后者是計 噬菌體的總數(shù) 。 (二)、噬菌體效價的測定 20220216 Yang SY 雙層平板法 底層平板( 2%瓊脂培養(yǎng)基 10mL) 上層平板 上層培養(yǎng)基( 1%瓊脂培養(yǎng)基 5mL) 宿主菌懸液(對數(shù)期菌液 ) 噬菌體試樣(合適稀釋液 ) 混勻 37℃ 10余 h 計數(shù)噬菌斑 20220216 Yang SY 定量描述烈性噬菌體生長規(guī)律的實驗曲線,稱作 一步生長曲線或一級生長曲線 。 潛伏期 ( latentphase) 裂解期 ( risephase) 裂解量 ( burstsize) (三)、一步生長曲線 ( one step growth curve) 一步生長曲線可分為三個時期: 20220216 Yang SY 指噬菌體的核酸侵入宿主細胞后至第一個噬菌體粒子裝配前的一段時間。 ( 1) 潛伏期 ( latent phase) 整段潛伏期中 沒有一個成熟的噬菌體粒子 從細胞中釋放出來 20220216 Yang SY 潛伏期又可分兩段 : ①隱晦期( eclipse phase) 指在