實(shí)驗(yàn)四、細(xì)胞器分離、制備與觀察(編輯修改稿)
2024-11-15 16:03 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 將 mol／ L蔗糖溶液 心管，然后沿管壁小心地加入 勻漿覆蓋于上層。用冷凍控溫的高速離心按下圖順序進(jìn)行差速離心。 分離細(xì)胞核： 鼠肝勻漿 700 g離心 10 min 沉淀 (細(xì)胞核及質(zhì)膜碎片 ) 上清液 (1) 洗滌 ( mol／ L預(yù)冷蔗糖溶液 5 mL洗滌 2次，每次 1000 g離心 15 min。 沉淀 (細(xì)胞核及質(zhì)膜碎片 ) 上清液 (2)→ 與上清 (1)合并 分離線粒體： 混合上清液 10000 g離心 10 min 沉淀 (線粒體 ) 上清液 (棄去 ) 洗滌 加預(yù)冷的 mol／ L蔗糖溶液 10 mL，10000 g離心 10 min 沉淀 (純化的線粒體 ) 上清液 (棄去 ) 3．活性鑒定： (1) 細(xì)胞核：取核沉淀 1滴涂于載玻片，加入Carnoy固定液 15 min，晾干。 Giemsa染液染10 min，蒸餾水漂洗數(shù)秒，用濾紙吸干水、用顯微鏡 (40 )檢查，細(xì)胞核呈紫紅色，混雜的胞質(zhì)為淺藍(lán)色碎片。 (2) 線粒體： 取線粒體沉淀滴在載玻片上，勿太密。滴加 1％詹鈉斯綠溶液染液， 10 min后用光學(xué)顯微鏡觀察，線粒體藍(lán)綠色，呈小棒狀或啞鈴狀。 玉米線粒體的分離 ? 從植物細(xì)胞分離線粒體，除了作線粒體功能測定外，在植物細(xì)胞遺傳工程中，常用于分離核外基因 — 線粒體 DNA等目的。 ? 分離線粒體的方法仍采用均勻介質(zhì)中的差速離心。介質(zhì)中 露醇代替。 EDTA整合二價(jià)陽離子， Ca2＋除去后細(xì)胞間粘著解體，促使組織分散成單個(gè)細(xì)胞。牛血清白蛋白 (BSA)能包在細(xì)胞外面，并作為競爭性底物削弱蛋白酶的作用。 【 材料 】 玉米黃化幼苗 (水稻、高粱等幼苗均可 )。 【 實(shí)驗(yàn)用品 】 1．試劑： （ 1）分離介質(zhì)： ， 50mmol/L的 Tris鹽酸緩沖液 ()， 3mmol/LEDTA， 蛋白 (
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