泌尿系統(tǒng)與男性生殖系統(tǒng)藥效學(xué)研究設(shè)計方法(編輯修改稿)
2024-11-14 16:59 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 用水負(fù)荷大鼠或 CRF模型大鼠常規(guī)方法觀察藥物有無利尿作用。 (三 )陽性對照藥 1．包醛氧淀粉或愛西特 (活性炭 ) 適用于以吸附腸道毒素來促進(jìn)毒裹排除、緩解癥狀的新藥。 2，尿毒清顆粒刑 適用降低毒素、改善腎功能為主要功效，用于慢性腎功能衰竭、氮質(zhì)血癥和尿毒癥早期的新藥。 3．地塞米松 地塞米松 0． 1mg／ kg(體重 )肌內(nèi)注射，每日一次，屬非特異性作用，可減輕病情。 三、動物模型建立方法 (一 )大鼠腺嘌呤 CRF模型 1. 原理 高濃度腺嘌吟通過黃嘌呤氧化酶的作用生成極難溶于水的 2， 8— 二羥腺嘌吟，后者沉積在腎小管，影響了氮質(zhì)化合物的排世，導(dǎo)致氮質(zhì)血癥、毒素蓄積從電解質(zhì)和氨基酸代謝紊亂，最終引起腎功能衰竭。 2．制作方法 用含 0． 75％腺嘌吟 (adenine)飼料喂養(yǎng)大鼠，每日投放量約350mg／ kg(體重 )。全部動物自由攝取飼料和飲水。 3．造模成功的指標(biāo)和藥物療效觀察 大鼠隨著進(jìn)食腺嘌吟飼料的日數(shù)增加而日漸消瘦，畏寒拱背，體毛脫落，生長抑制．多尿；血肌酐、尿素氮水平升高(喂飼 2星期后可見升高 )；中分子物質(zhì)水平升高；電解質(zhì)代謝紊亂 (高磷、高鉀、低鈉、低鈣等 )；氨基酸紊亂 (主要為必需氨基酸降低 )；貧血。病理學(xué)觀察表明，腎臟明顯增大 (第八星期較腎臟大 4倍多 )，腎組織內(nèi)有大量腺嘌崎代謝物結(jié)晶沉積，大部分腎小管破壞，有淋巴細(xì)胞浸潤，局部纖維縱織增生。 藥物療效觀察： (1)一般觀察：動物的體重、尿量、體毛和 — 般活動狀況。 (2)生化及血液檢查。 (3)尿液檢查： 24h尿量及尿蛋白總量。 (4)腎臟病理形態(tài)學(xué)觀察：肉眼及組織學(xué)觀察，有條件時可作病理切片的圖像分析。 4．注意點(diǎn) (1)為了減少差異，最好用雄性動物。 (2)采血時應(yīng)特別住意防溶血 . (3)配制飼料時，腺嘌呤要充分與飼料混合均勻。 (4)亦可配成含 0． 5%腺嘌呤的飼料。 (二 )大鼠 5／ 6腎切除的 CRF模型 1．原理 大鼠 5／ 6腎切除后殘余在腎單位中血液動力學(xué)改變，引起殘余腎單位的高濾過蛋白尿，導(dǎo)致腎小球硬化為主要特點(diǎn)的 CRF。 2．制作方法 大鼠用戊巴比妥鈉 3035mg/kg體重腹注射麻醉，局部剪毛，常規(guī)皮膚消毒，背左側(cè)或腹部切口，充分暴露左側(cè)腎肌，剝離腎包膜，迅速切除上、下極，以明膠海綿壓迫止血．然后分層縫合。術(shù)后 7—10日行第二次手術(shù)，同樣方法麻醉，右側(cè)背部切開暴露右腎，結(jié)扎腎蒂，摘除右腎。 3. 造模成功的指標(biāo)和藥物療效觀察 大鼠傷口應(yīng)無出血和感染，術(shù)后大鼠體重明顯下降，食量，活動量均減少，體毛疏松不齊，術(shù)后 7日可山現(xiàn)蛋白尿； BUN、Scr水平逐漸升高；電解質(zhì)紊亂；氨基酸代酣紊亂；貧血；組織病理學(xué)觀察?？梢姎堄嗄I臟代償性增大，鏡檢可見腎小球毛細(xì)管擴(kuò)張，內(nèi)皮細(xì)胞肥大，系膜基質(zhì)增生，大鼠上皮內(nèi)皮細(xì)胞壞死，毛細(xì)管腔消失的腎小球玻璃樣變性從硬化的病理過程。 藥物的療效觀察基本同腺嘌呤。 4．注意點(diǎn) (1)手術(shù)要熟練，最好由 1人切除，以減少損傷誤差。 (2)手術(shù)注意防止損傷腎上腺；摘除腎臟時要結(jié)腎蒂。 (3)切除腎臟時最好在腹膜外進(jìn)行，盡量不打開腹膜進(jìn)入腹腔，以減少感染機(jī)會。 (4)如果用藥時間長或需要損傷程度輕，可在手術(shù)前用低蛋白飼料。 (5)應(yīng)設(shè)假手術(shù)組代替正常動物對照組。 (三 )大鼠經(jīng)液氮冷凍腎臟引起的 CRF模型 1 原理 與大鼠 5／ 6腎切除的 CRF模型基本相同。 2 操作方法 實驗用成年健康大鼠，雄性，體重 200— 300g，注射戊巴比妥鈉 40mg／ kg(體重 )麻醉，常規(guī)消毒皮膚，背部一側(cè)切口，分離肌層，暴露左腎，用食指從腹部相應(yīng)部位輕輕向上頂起，腎臟即滑出皮膚切口外面，這樣便操作，然后剝離筋膜。將預(yù)先浸入液氮瓶內(nèi)的冷刀依次在腎臟的上下極和外側(cè)前后共 4個位，每處冷凍 40s，然后復(fù)位腎臟，分層縫合。 2星期后，以同樣的操作二期手術(shù)，摘右腎。術(shù)后 6— 12星期呈現(xiàn)穩(wěn)定的模型。 3 造模成功的指標(biāo)和藥物療效觀察等 與大鼠 5／ 6腎的模型同。 4 注意 用該模型評價新藥藥效成功的關(guān)鍵是冷凍損傷腎臟的程度要適當(dāng)，多人操作，應(yīng)冷凍損傷度一致。 (四 )小鼠電凝摘除腎臟 CRF模型 1 原理 燒灼小鼠右腎表面 2星期后左腎摘除，燒灼腎皮質(zhì)壞死，腎小球、腎小管大量破壞，殘余腎單位的功能代償性增強(qiáng)，形成以腎小球硬化，腎間質(zhì)組織纖維化為主要特點(diǎn)的模型。 2．制作方法 小鼠麻醉后，背右側(cè)切口 0． 8cm，暴腎臟，剝離周圍脂肪組織及腎包膜，用電燒灼電凝右腎表面，深度約 1mm，保留距腎門周圍2mm的皮質(zhì)部分不受燒灼。將經(jīng)燒灼的腎臟放回，縫合肌層與皮膚．操作全過程不超過 l0min。 14 日后二期手術(shù)，依法麻醉，摘除左腎。 3．注意點(diǎn) (1)電灼燒要掌握好深淺度，最好 1人操作以減少誤差。 (2)小鼠血清肌酐水平甚低 (0． 1mg／ dl)，常規(guī)方法測不出。 第三節(jié) 慢性腎炎藥 一、實驗設(shè)計的醫(yī)學(xué)基礎(chǔ) 慢性腎炎 (慢性腎小球腎炎 )屬中醫(yī)“水腫”、“水氣”、“腫脹”等范疇．是較難治的癥，病因難除。常見有肺腎氣虛、脾腎陽虛、肝腎虛、水濕、濕熱、血瘀。其臨床表現(xiàn)為水腫、高血壓、蛋白尿、血尿及腎功能損傷等。 現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為，慢性腎炎僅少數(shù)是由急性腎炎發(fā)展來，而大多數(shù)由病理類型決定其病情必然遷延發(fā)展，起病即為慢性。治療慢性腎炎的中藥，應(yīng)有①治本作用，去外、內(nèi)致病因子的繼續(xù)作用。②治標(biāo)作用。 二、藥效學(xué)研究的實驗設(shè)計 (一 )對慢性腎炎動物模型的治療作用實驗 1
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