研究生分子醫(yī)學(xué)技能實(shí)驗(yàn)四(編輯修改稿)
2024-11-12 19:51 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 賴的酶促合成反應(yīng) ，整個(gè)擴(kuò)增過程分三步： ① 變性：加熱 ， 模板 DNA形成兩條單鏈 ② 退火：降溫 ， 模板單鏈 DNA與引物配對結(jié)合 ③ 延伸：在 DNA聚合酶及鎂離子等存在的條件下 ， 引物 339。端向前延伸 ， 合成與模板配對的新鏈 上述三步為一個(gè)循環(huán)，經(jīng)過一個(gè)循環(huán) DNA量增加一倍。新合成的鏈又可以成為新一輪循環(huán)的模板，經(jīng)過 2530個(gè)循環(huán)后目的 DNA就可以擴(kuò)增 106~109 倍。 通過循環(huán)可以提高 PCR的特異性。 PCR反應(yīng)體系的組成及功能 PCR的完成是在一個(gè) EP管中完成 ， 一個(gè)完整的PCR反應(yīng)體系應(yīng)包括以下成分： ?引物 ：是預(yù)擴(kuò)增 DNA片段兩端的已知序列 ， 是保證 PCR特異性的關(guān)鍵因素 ， 合理正確的引物設(shè)計(jì)可以提高擴(kuò)增的效率與特異性 。 終濃度為 ~； 濃度過高易形成引物二聚體且產(chǎn)生非特異性產(chǎn)物 。 一般來說用低濃度引物經(jīng)濟(jì) 、 特異 ，但濃度過低 ， 不足以完成 30個(gè)循環(huán)的擴(kuò)增反應(yīng) ， 則會(huì)降低 PCR的產(chǎn)率 。 ? Ta
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