【文章內(nèi)容簡介】 冷卻至 58℃，過濾于棕色試劑瓶，冷卻至 26℃，加入 10ml1mol/L HCl和 （ Na2S2O5），振搖使其溶解混均，密封瓶口，置黑暗低溫（ 10℃）處， 4— 12 小時(shí)檢查，待溶液透明無色或呈淡茶色即可使用。如果發(fā)現(xiàn)仍有不同程度的紅色未褪盡，可加入 性炭不斷振搖后，在黑暗低溫（ 4℃）處靜置過夜，過濾后可以使用。 通常經(jīng)活性炭處理后的試劑著色力會(huì)減弱，所以最好不要用活性炭處理，關(guān)鍵的問題在于偏重亞硫酸鈉的質(zhì)量，好的偏重亞硫酸鈉打開瓶蓋即有明顯的 SO2氣味 （ 李懋學(xué)，張敦芳， 1991） 。 漂洗液： 5ml 1mol/L HCl+5ml 10% Na2S2O5 +100ml H2O。 材料處理和染色程序 ： 1）固定材料經(jīng) 50%酒精轉(zhuǎn)入蒸餾水； 2）將材料浸入事先預(yù)熱至 60177。 1℃的 1mol/L HCl保溫 5— 15分鐘； 3）冷 1mol/L HCl洗一次； 4）浸入 Schiff試劑染色（ 10℃黑暗條件） 1— 2小時(shí)； 5）漂洗液漂 洗三次，每次 5分鐘； 6）蒸餾水洗 5— 10分鐘； 7） 45%乙酸壓片。 壓片操作及制作永久封片 1） 壓片準(zhǔn)備和操作 植物染色體壓片法是目前國內(nèi)外最普遍采用的方法。這是一種手工技術(shù)，因此，具體的操作方法和使用的工具并無一定之規(guī)。但目的只有一個(gè)，那就是使分生組織中期分裂相細(xì)胞染色體分散開來，使我們在顯微鏡下可清晰地辨別每一染色體的形態(tài)結(jié)構(gòu) （ 李懋學(xué)，張敦芳， 11 1991） 。但影響染色體分散效果的因素很多。內(nèi)因包括具體植物細(xì)胞壁的成分性質(zhì)、細(xì)胞質(zhì)的粘滯度和染色體的大小；外因包括前處理和解離的適 當(dāng)與否和操作者技術(shù)的掌握。 工具包括不銹鋼尖鑷子、一支鉛筆、載玻片和蓋玻片若干。此外，還需酒精燈、雙面刮胡刀片和濾紙等。 國產(chǎn)載玻片和蓋玻片都不是很干凈，如果想得到好的結(jié)果，建議認(rèn)真清洗之。方法是煮沸一鍋（鍋要干凈）蒸餾水，加入適量無酶洗衣粉，而后將載玻片一片一片放入水中浸泡半個(gè)工作日，再一片一片取出，同時(shí)用干凈紗布兩側(cè)擦洗，放自來水下流水沖洗掉洗衣粉泡沫，轉(zhuǎn)入蒸餾水浸泡，最后放入標(biāo)本缸，加入 70%酒精儲(chǔ)存?zhèn)溆谩Ｓ弥叭〕?，用新紗布擦干放入干凈盒子中即可使用。染色體壓片用蓋玻片為 20179。 20mm2至 24179。 24mm2。很薄不能像 載玻片一樣清洗，一般是直接放入 70%酒精中浸泡適當(dāng)時(shí)間，用前紗布擦干即可。操作之前應(yīng)注意環(huán)境的潔凈。 在壓片時(shí)注意不能劃片，并進(jìn)行敲片（是染色體盡量分散），操作過 程因人而異，熟能生巧。掌握兩個(gè)過程，首先是細(xì)胞分散（但不破裂）， 其次是染色體分散。 2）制作永久封片 a) 冰凍揭蓋片：現(xiàn)在一般使用液氮，用雙面刀片撬起蓋片，保留載片； b) 干燥：載片放入溫箱（不超過 60℃）烘干 24 小時(shí)； c) 樹膠封片：生物學(xué)制片專用膠，化學(xué)試劑公司有售，滴加樹膠，加蓋新的蓋玻片； d) 干燥封固：室溫或 3045℃溫箱 （ 尤瑞麟， 2020） 。 酶解去壁低滲法簡介 如果感覺以上步驟之后鏡檢效果不是很理想可以考慮進(jìn)行低滲，起作用是幫助細(xì)胞的解離，使細(xì)胞中染色體更易分散 （ 李國珍， 1985；劉祖洞， 1987） 。 1）前低滲 經(jīng)預(yù)處理的材料，傾去預(yù)處理液，直接加入 ， 25℃左右處理30分鐘。 2）酶解去壁 吸除低滲液，加入 %的纖維素酶和果膠酶（ 1： 1）混合液， 37℃消化 10分鐘。 3）后低滲 用同溫蒸餾水將材料輕輕清洗 2— 3次去酶，然后在雙蒸水中停留 10— 30分鐘。 參考文獻(xiàn)： [1] 李懋學(xué)，張敦芳 .植物染色體研究技術(shù)， 1991 [2] 劉祖洞《遺傳學(xué)》上、下冊，高教出版社， 1990 [3] 周云龍主編 . 植物生物學(xué)（第 2版） . 北京：高等教育出版社 , 2020 [4] 楊 繼主編 . 植物生物學(xué)（第 2版） . 北京 : 高等教育出版社 , 2020 [5] 楊漢民 .細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)，高等教育出版社， 1997 [6] 李樹賢 .植物染色體與遺傳育種，科學(xué)教育出版 [7] 尤瑞麟 .植物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)教程 —— 組織培養(yǎng)、細(xì)胞化學(xué)和染色體技術(shù) .北京大學(xué)出版社，2020 [8] 李國珍 .染色體及其研究方法，科學(xué)出版社。， 1985 [9] 李博主編 . 生態(tài)學(xué) .高等教育出版社 ,2020 [10] 劉祖洞 .遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)，高教出版社， 1987 [11] 洪德元 .植物細(xì)胞分類學(xué)，科學(xué)出版社， 1990 [12] 劉永安 ,馮海生 ,陳志國等 .植物染色體核型分析常用方法概述 [J].貴州農(nóng)業(yè)科學(xué) ,2020, 34(1):98～ 102 12 （ 二 ）成果情況 通過以上比較深入的理論學(xué)習(xí)，以及在我們實(shí)驗(yàn)過程中的實(shí)踐論證，經(jīng)過幾周的不斷改良，我們初步確定了能染上很好效果的染液配方，這樣的配方配出的染液不僅可對 菊 科 風(fēng)毛菊 屬 的材料有良好的效果，對其他材料比如豆科 冬麻豆、膀胱豆、黃花木、銀合歡， 桔梗科藍(lán)鐘花 、菊科 風(fēng)毛菊 的種子都有良好的效果， 染色體著色深，細(xì)胞質(zhì)著色淺，對比鮮明，有利于核型分析中染色體的計(jì)數(shù)與測量，對進(jìn)一步開展實(shí)驗(yàn)有很好的保障。 具體配方如下： 1 卡寶品紅配制方法 1) 原液 A：稱 3g堿性品紅溶于 100ml70%酒精（此液可無限期儲(chǔ)存，不會(huì)變質(zhì)）。 2) 原液 B：取 10ml原液 A與 90ml 5%苯酚水溶液混合，置 37℃溫箱溶解 2— 4 小時(shí)（此液不穩(wěn)定，限 2周之內(nèi)使用）。 3) 原液 C：取原液 B 55ml與冰乙酸、甲醛各 6ml混合均勻 （此液也稱為苯酚品紅，也可進(jìn)行染色，不過效果不好，染染得過深） 。 4) 染色液：取原液 C 20ml，加入 80ml 45%冰 乙酸和 g山梨醇混合溶解 （此液也稱為改良苯酚品紅，兩周后染色效果很好） 。 該染色液配制后為淡品紅色，如果立即使用染色較淡，放置 2 周后染色能力明顯增強(qiáng)，而且放置的時(shí)間越久染色效果越好。此液可在常溫下存放 2年保持穩(wěn)定不變質(zhì)。 染色時(shí)采用滴染方法，在 應(yīng)用該染色液 時(shí) ，染色的效果與鹽酸解離有密切關(guān)系。 2 地衣紅 先配制 500ml 45%的醋酸水溶液，在電驢上加熱煮沸 ，移去火源，緩緩 （切忌緩慢，否則噴濺危險(xiǎn)） 加入 ，攪動(dòng)溶解 ,待全部投入后再煮 12min，并加入一顆生銹的鐵釘， 1min后取出。 此染液染上的細(xì)胞呈淡紅色，染色體呈深紅色，對比很良好，便于觀察。注意 地衣紅易溶于酒精，制片不可用酒精脫水封片。 通過前期的實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備及展開實(shí)驗(yàn)，比較相鄰屬的實(shí)驗(yàn)方法，進(jìn)行梯度試驗(yàn)，不斷總結(jié)，得到了以下處理菊科風(fēng)毛菊屬種子及 核型染色體研究的操作方案： 鑒于在實(shí)驗(yàn)室的現(xiàn)有條件和空間，不能對植株進(jìn)行直接栽種培養(yǎng)，所以取材不能采用植株的芽尖、莖尖等分生區(qū)旺盛的部位，而是對種子進(jìn)行萌發(fā)培養(yǎng) ，這也是為了避免在同一植株上做該物種的核型研究，所用的種子來自同種不同居群，保證了得出的結(jié)論的代表性和科學(xué)性。首先將 待測種子放入培養(yǎng)皿中兩 層濾紙上，加水 至種子處于濕潤的環(huán)境，保障種子發(fā)芽時(shí)所需的水環(huán)境。然后將培養(yǎng)皿 置 于 2226℃ 的恒溫箱中萌發(fā) 培養(yǎng)， 風(fēng)毛菊屬種子的萌發(fā)周期一般為 57 天， 810 天后根的長度就可達(dá)到實(shí)驗(yàn)取材時(shí)所需的長度 ，然后將長度適宜的幼根 取下 ，置于處理用的瓶子內(nèi)， 室溫下 用 8羥 基喹啉處理 45 小時(shí)， 此過程要嚴(yán)格避光，確保預(yù)處理的效果。預(yù)處理之后再將材料用蒸餾 水沖洗三次， 于 4℃冰箱中卡諾氏固定液（無水乙醇： 冰 醋酸 =3： 1，現(xiàn)配現(xiàn)用 ）固定 1224 小時(shí) ，因固定液易揮發(fā)，在處理時(shí)要換固定液 12 次 。固定好之后將材料用蒸餾水沖洗三次， 用 1mol/L 的 HCl 在 60℃下 水浴解離 1015min，解離時(shí)間的長短非常重要，直接影響著染色的效果和敲片后染色 體在細(xì)胞中的形態(tài)，所以嚴(yán)格控制好時(shí)間，時(shí)間一到馬上進(jìn)行下一步的處理。解離好之后需用蒸餾水沖洗 6 次，目的是為了把殘留在根尖上的鹽酸清洗干凈，染色時(shí)才不會(huì)受鹽酸的影響，沖洗好之后用卡寶品紅染色 812小時(shí)，就可進(jìn)行壓片鏡檢了，在 光學(xué)顯微鏡下觀察， 低倍鏡下找到細(xì)胞，再換至高倍鏡下觀察，找到中期細(xì)胞， 在 100 倍油鏡下挑選分裂相清晰、染色體收縮長短適中、著絲粒明顯的細(xì)胞進(jìn)行拍照，保存細(xì)胞圖片，其中間期、前期、中期、后 13 期、末期的細(xì)胞圖都要有，以便進(jìn)行接下來的核型分析。并對 染色體分散良好、形態(tài)清晰 、中期細(xì)胞多 的片子 用樹脂膠片封片制成永久封片在冰箱里保存。 同時(shí) ，在 整個(gè) 實(shí)驗(yàn)進(jìn)行中各個(gè)步驟所處理的時(shí)間是嚴(yán)格保證的，所以處理好一步之后就要做好下一步的準(zhǔn)備，通常是設(shè)一個(gè)鬧鐘以提醒自己下一步的處理時(shí)間到了。 綜上所述，經(jīng)過改良的卡寶品紅可以使風(fēng)毛菊屬 的材料染上很好的效果，以及經(jīng)過實(shí)驗(yàn)探索得出的各個(gè)試驗(yàn)操作方法，可以得到預(yù)期的實(shí)驗(yàn)效果，拍到良好的核型分析圖片，對接下來的實(shí)驗(yàn)有很好的指導(dǎo)作用。 二、 存在的問題和困難 1. 時(shí)間比較緊，周末從呈貢到本部實(shí)驗(yàn)室來回花費(fèi)在車上的時(shí)間長，且公交比較難擠； 2. 染液效果不佳，改良試劑花 費(fèi)周期較長，主要原因是試劑比較陳舊，有些已發(fā)生變質(zhì)，造成 實(shí)驗(yàn)效果 無預(yù)期的好 。 三 、有何建議和要求 1. 如果可能的話盡早將實(shí)驗(yàn)室搬至呈貢校區(qū)； 2. 重新購置一批新的藥品 （比如國外產(chǎn)的地衣紅） 。 四 、學(xué)院意見 主管領(lǐng)導(dǎo)簽名（蓋章）： 年 月 日 14 以下是附加文檔，不需要 的朋友下載后刪除，謝謝 頂崗實(shí)習(xí)總結(jié)專題 13 篇 第一篇 :頂崗實(shí)習(xí)總結(jié) 為了進(jìn)一步鞏固理論知識(shí)，將理論與實(shí)踐有機(jī)地結(jié)合起來，按照學(xué)校的計(jì)劃要求，本人進(jìn)行了為期個(gè)月的頂崗實(shí)習(xí)。這個(gè)月里的時(shí)間里，經(jīng)過我個(gè)人的實(shí)踐和努力學(xué)習(xí)，在同事們的指導(dǎo)和幫助下，對村的概況和村委會(huì)有了一定的了解，對村村委會(huì)的日常工作及內(nèi)部制度有了初步的認(rèn)識(shí)，同時(shí)，在與其他工作人員交談過程中學(xué)到了許多難能可貴經(jīng)驗(yàn)和知識(shí)。通過這次實(shí)踐，使我 對村委會(huì)實(shí)務(wù)有所了解，也為我今后的順利工作打下了良好的基礎(chǔ)。 一、實(shí)習(xí)工作情況 村是一個(gè)（此處可添加一些你實(shí)習(xí)的那個(gè)村和村委會(huì)的介紹）我到村村委會(huì)后，先了解了村的發(fā)展史以及村委會(huì)各個(gè)機(jī)構(gòu)的設(shè)置情況，村委會(huì)的規(guī)模、人員數(shù)量等，做一些力所能及的工作，幫忙清理衛(wèi)生，做一些后勤工作；再了解村的文化歷史，認(rèn)識(shí)了一些同事，村委會(huì)給我安排了一個(gè)特定的指導(dǎo)人；然后在村委會(huì)學(xué)習(xí)了解其他人員工作情況，實(shí)習(xí)期間我努力將自己在學(xué)校所學(xué)的理論知識(shí)向?qū)嵺`方面 15 轉(zhuǎn)化，盡量做到理論與實(shí)踐相結(jié)合。在實(shí)習(xí)期間我遵守了工作紀(jì)律，不遲到、不早退，認(rèn) 真完成領(lǐng)導(dǎo)交辦的工作。 我在村委會(huì)主要是負(fù)責(zé)管理日常信件的工作，這個(gè)工作看似輕松，卻是責(zé)任重大，來不得辦點(diǎn)馬虎。一封信件沒有及時(shí)收發(fā)，很有可能造成工作的失誤、嚴(yán)重的甚至?xí)斐删薮蟮慕?jīng)濟(jì)損失。很感謝村委會(huì)對我這個(gè)實(shí)習(xí)生的信任，委派了如此重要的工作給我。在實(shí)習(xí)過程中，在信件收發(fā)管理上，我一直親力親為，片刻都不敢馬虎。 為了做好信件的管理工作，我請教村委會(huì)的老同事、上網(wǎng)查閱相關(guān)資料，整理出了一套信函管理的具體方法。每次郵遞員送來的信件，我都要親自檢查有無開封、損壞的函件，如果發(fā)現(xiàn)有損壞的函件，我馬上聯(lián)絡(luò)接收人親自 來查收。需要到郵局領(lǐng)取的函件，我都親自到郵局領(lǐng)取，并把信函分別發(fā)放到每個(gè)收件人的手里。對于收到的所有信函，我都分門別類的登記，標(biāo)注好收發(fā)人的單位、姓名還有來函日期等等。我對工作的認(rèn)真負(fù)責(zé)，受到了村委會(huì)領(lǐng)導(dǎo)和同事們的一致好評(píng)，在他們的鼓勵(lì)下，我的工作干勁更足了。 在工作之余，我還經(jīng)常去村民家里，幫助他們做一些我力所能及的事情，也讓我收獲了很多知識(shí)，學(xué)會(huì)了許多技能。我學(xué)會(huì)了一些常見農(nóng)作物的生長特征，也學(xué)會(huì)了怎么給農(nóng)作物施肥，灑藥。這些，都將是我今后人生道路上的寶貴財(cái)富。 短短個(gè)月的實(shí)習(xí)生活很快就過去了，這次實(shí)習(xí) 是我從學(xué)校踏入社會(huì)的第一步。在這里，我感受到了村民們的純樸，也體會(huì)到了農(nóng)村生 16 活的不易，更加深刻的認(rèn)識(shí)到了作為當(dāng)代大學(xué)生身上肩負(fù)的使命。在這次實(shí)習(xí)生活中，村委會(huì)的叔叔、阿姨們對我十分的照顧，在工作中，在生活上都給予了我很多的幫助，也對我寄予了很高的期望。通過這次實(shí)習(xí)，鍛煉了我的做事能力，養(yǎng)成了對人對事的責(zé)任心，也堅(jiān)定了我加強(qiáng)學(xué)習(xí)，提升自我價(jià)值的信心。 二、發(fā)現(xiàn)的問題和建議 在此次在村村委會(huì)頂崗實(shí)習(xí)的工作中，確實(shí)讓我學(xué)到了不少書本以外的知識(shí)，同時(shí)我也發(fā)現(xiàn)了不少問題。 第一，該村村委會(huì)的工作人員文化水平相對偏低， 在村務(wù)工作的處理上，方式方法比較粗放。 第二，村委會(huì)工作人員思想比較守舊，缺乏對新事物、新觀念的學(xué)習(xí)和認(rèn)識(shí)。 第三，村委會(huì)的現(xiàn)代化辦公水平還比較低，雖然配備了電腦等現(xiàn)代化辦公工具，但是實(shí)際的利用程度很低。 第四，村委會(huì)人員由于不是國家編制，工作人員的工作熱情和工作態(tài)度不是很積極。 三、實(shí)習(xí)的心得體會(huì) 剛開始去村村委會(huì)實(shí)習(xí)的時(shí)候，我的心情充滿了激動(dòng)、興奮、期盼、喜悅。我相信，只要我認(rèn)真學(xué)習(xí)，好好把握，做好每一件事，實(shí)習(xí)肯定會(huì)有成績。但后來很多東西看似簡單，其實(shí)要做好它很不容易。 17 通過實(shí)踐我深有感觸，實(shí)習(xí)期雖然很 短，卻使我懂得了很