20xx探討在?高海拔地區(qū)應(yīng)用血液基因組dna提取試劑盒的最佳條件精選(編輯修改稿)
2025-03-30 05:18 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 A可以獲得滿意的產(chǎn)量和純度。 材料與方法 實(shí)驗(yàn)材料 2017年5月西藏阜康醫(yī)院體檢的健康體檢者的血液樣品109份作為基因組DNA提取的材料。 主要試劑與儀器 RelaxGene Blood DNA System血液基因組DNA提取系統(tǒng) （非離心柱型） [天根生化科技 （北京） ], 其產(chǎn)品組成：細(xì)胞裂解液CL2250ml, 緩沖液FG 120ml, 洗脫緩沖液TB60ml, ， 水為雙蒸滅菌水。 高速臺(tái)式離心機(jī) （Sigma） 。超微量紫外可見分光光度計(jì) （Thermo） . 實(shí)驗(yàn)分組 將109份血液樣品的每一份分為2組：實(shí)驗(yàn)組 （109份） 和對(duì)照組 （109份） . 實(shí)驗(yàn)方法 對(duì)照組按300mu。l抗凝血750mu。l裂解液提取DNA, 詳細(xì)的操作方法對(duì)照組采納RelaxGene Blood DNA System血液基因組DNA提取系統(tǒng)試劑盒說明書提取方法?！ ?shí)驗(yàn)組按300mu。l抗凝血900mu。l裂解液提取DNA, 采納RelaxGene Blood DNA System血液基因組DNA提取系統(tǒng) （非離心柱型） 試劑盒， 對(duì)實(shí)驗(yàn)條件和方法進(jìn)展優(yōu)化和改良， 其方法是：1） 將抗凝血樣 （2ml血液/管） 從80℃冰箱中， 室溫融化， 利用移液器在樣品管中把血樣充分混勻， 取300mu。l血樣置于尖底離心管中并向管中參加750mu。l細(xì)胞裂解液CL, 顛倒混勻10次。重復(fù)2次。2） 離心12 000rpm 1min、棄上清， 將離心管倒置于潔凈吸水濾紙上5min, 如今確保管底沉淀在管中。3） 按100∶1配制FG與蛋白酶K混合液， 現(xiàn)用現(xiàn)配。將混合液按照200mu。l/管的量參加到已棄上清并倒置5 min的EP管內(nèi)， 立即渦旋混勻至無團(tuán)塊。4） 65℃水浴過夜 （20h） , 最初的2h內(nèi)每1015min顛倒混勻23次， 并用手指彈勻， 水浴后可見溶液的顏色從紅色變?yōu)辄S綠色。5） 參加異丙醇150mu。l, 渦旋混勻至絲狀或簇狀DNA為止。6） 離心12 000rpm 5min、棄上清將EP管倒置于潔凈的吸水濾紙上、確保沉淀在EP管中、參加150mu。l 70%乙醇、渦旋振蕩5s、離心12 000rpm
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