【正文】 的高度的相似。 CRISPR介導(dǎo)基因的編輯技術(shù) CRISPR介導(dǎo)基因的編輯技術(shù)的研究進(jìn)展 基因打靶，尤其是同源重組技術(shù)出現(xiàn)之后，無論是在科學(xué)研究，還是在工業(yè)生產(chǎn)上都有了革命性的變革。例如，如果我們推測在弄得發(fā)育過程中包括有某一特殊基因的作用，這樣我們通過基因打靶將正?；?“knock out”，而代之以錯誤的基因，這樣導(dǎo)致正?；虻耐耆Щ?，如果具有這中基因結(jié)構(gòu)的新生鼠有畸形的 小腦，則我們可以確定這個基因是小腦發(fā)育正常所必需的基因。 北京電子科技職業(yè)學(xué)院生物工程學(xué)院畢業(yè)論文 第一章同源 重組技術(shù)的研究進(jìn)展 2 （ 2） 標(biāo)號重復(fù)基因重組育種 基因重組育種就是把不同的兩個或兩個以上的生物遺傳信息一起至于一個宿主細(xì)胞中，創(chuàng)建具有目的生物特性的重組柱。 畢 業(yè) 論 文 設(shè)計題目 用同源重組的方法進(jìn)行基因修復(fù) I 目錄 摘要 .....................................................................................................................................i Abstract................................................................................................................................ ii 第一章 同源重組技術(shù)的研究進(jìn)展 .........................................................................................1 1 前言 ..........................................................................................................................1 微生物育種技術(shù)概述 ...................................................................................1 同源重組技術(shù)發(fā)展 .......................................................................................2 Red 同源重組技術(shù) .......................................................................................3 CRISPR 介導(dǎo)基因的編輯技術(shù) ............................................................................4 第二章 質(zhì)粒 ptarget 的構(gòu)建 ..................................................................................................8 1 材料 ..........................................................................................................................8 菌株和質(zhì)粒 .......................................................................................................8 培養(yǎng)基與常用溶液 ............................................................................................8 克隆中所用到的引物 .........................................................................................9 儀器 ................................................................................................................9 2 方法 ......................................................................................................................9 PCR 反應(yīng)體系與反應(yīng)條件 ............................................................................... 10 凝膠回收 ........................................................................................................ 10 gibson .......................................................................................................... 11 將質(zhì)粒 Ptarget 導(dǎo)入 DH5α中 ...................................................................... 11 ptarget 中 N20 的測序 ...................................................................................... 12 ptarget 質(zhì)粒提取 .............................................................................................. 12 3 結(jié)果分析 ............................................................................................................. 12 ptarget 質(zhì)粒的構(gòu)建 .......................................................................................... 12 N20 測序?qū)?比 ................................................................................................. 13 4 討論 ......................................................................................................................... 14 第三章 基因組片段的獲取與驗證 ....................................................................................... 15 1 材料 ........................................................................................................................ 15 菌株和質(zhì)粒 .................................................................................................... 15 引物 .............................................................................................................. 15 大腸桿菌培養(yǎng)基 ............................................................................................. 16 儀器 .............................................................................................................. 16 2 方法 ........................................................................................................................ 16 細(xì)菌基因組的分離 .......................................................................................... 17 PCR 反應(yīng)體系與反應(yīng)條件 ............................................................................... 18 DNA片段的回收與純化 .................................................................................. 19 T 克隆的反應(yīng)體系 與反應(yīng)條件 ......................................................................... 19 化學(xué)轉(zhuǎn)化 ....................................................................................................... 20 T—clone vector 的菌落驗證 PCR 反應(yīng)體系與反應(yīng)條件 ..................................... 20 3 結(jié)論與分析 ............................................................................................................. 20 muBL21 基因組 DNAtyrA、 tnaB、 talB、 gabD、 gabT 基因的驗證 ................ 20 4 討論 ......................................................................................................................... 21 II 第四章 基因同源重組 ................................................................................................. 22 1 材料 ......................................................................................................................... 22 菌體和質(zhì)粒 ............................................................................................... 22 培養(yǎng)基與常用溶液 .......................................................................................... 22 常用溶液與試劑 ........................................................................................... 23 引物 ............................................................................................................... 23 儀器 .............................................................................................................. 23 2 方法 .........................