【正文】 連接兩個 DNA片段 基因工程 a 限制性核 酸內(nèi)切酶 能夠識別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開 a 名稱 作用 參與的生理 過程與應(yīng)用 作用位點 (如下圖 ) DNA 聚合酶 在脫氧核苷酸鏈上添加單個脫氧核苷酸 DNA的復(fù)制 a RNA 聚合酶 在核糖核苷酸鏈上添加單個核糖核苷酸 轉(zhuǎn)錄 a 解旋酶 使核堿基間氫鍵斷裂形成單脫氧核苷酸鏈 DNA復(fù) 制及轉(zhuǎn)錄 b 逆轉(zhuǎn)錄酶 以 RNA為模板合成 DNA 逆轉(zhuǎn)錄、 基因工程 — 特別提醒： ① DNA連接酶和 DNA聚合酶的作用都是催化形成磷酸二酯鍵 ， 而不是氫鍵 ， 氫鍵是分子間的靜電吸引力 ，不需要通過酶的催化形成 。 現(xiàn)有多個上述線性 DNA分子 ， 若在每個 DNA分子上至少有 1個酶切位點被該酶切斷 ， 則從理論上講 ， 經(jīng)該酶酶切后 ， 這些線性 DNA分子最多能產(chǎn)生長度不同的 DNA片段種類數(shù)是 ( ) A． 3 B． 4 C． 9 D． 12 [答案 ] C [解析 ] 每一種限制性內(nèi)切酶切割 DNA后會留下特征性的黏性末端 ， 同時一次切割后 ， 會把 DNA分割成兩個片段 ， 且不同的限制酶切后的片段不一樣 ， 如果將題圖中的三個切割位點自左至右依次標(biāo)為甲 、 乙 、 丙 ， 只在甲處切 ， 可產(chǎn)生兩個片段 ， 即 a和右邊的 b＋ c＋ d段 ， 如果只在乙處切 ， 就有 a＋ b和 c＋ d段 ， 如果只在丙處切 ， 就有 a＋ b＋ c和 d段 ， 在甲 、 乙兩處同時切 ， 就有 a、 b和 c＋ d段 ， 在乙 、 丙處同時切 ， 就有 a＋ b和c、 d段 ， 在甲 、 丙兩處同時切 ， 就有 a、 b＋ c、 d段三種片段 ，在甲 、 乙 、 丙三處同時切 ， 就有 a、 b、 c、 d四種片段 。 (2)種類：迄今已從近 300種不同的微生物中分離出了約4000種限制酶 。 經(jīng)限制酶切割產(chǎn)生的DNA片段末端通常有兩種形式： ?________和 ?________?；蚬こ痰膽?yīng)用則主要從植物基因工程、動物基因工程和基因治療等幾個方面進(jìn)行了闡述。 2． 簡述 DNA重組技術(shù)所需三種基本工具的作用 。 (2) 基因工程中使用的載體有： ○25 ________ 、 λ 噬菌體的衍生物和 ○26 _____ ____ ___ 等。 ① GC ? ② AA T TC ? ③? GC ④? CT T AA CG ? G ? ? CG ? G (1) 其中 ① 和 ________ ____ 是由一種限制酶切割形成的____________ 末端，兩者要重 組成一個 DNA 分子，所用 DNA連接酶通常是 ________ 。 現(xiàn)在所用的質(zhì)粒幾乎都是人工改造的 。 若在某目的基因的兩側(cè)各有 1個 EcoR I的切點 ， 請畫出目的基因兩側(cè)被限制酶 EcoR I 切 割 后 所 形 成 的 黏 性 末 端 ：__________________________________________。 再將滅菌絨布按到培養(yǎng)基上 ， 使絨布面沾上菌落 ， 然后將絨布按到含四環(huán)素的培養(yǎng)基上培養(yǎng) ， 得到如圖三的結(jié)果 (空圈表示與圖二對照無菌落的位置 )。 質(zhì)粒在受體細(xì)胞中能隨受體細(xì)胞 DNA的復(fù)制而復(fù)制 ， 能進(jìn)行目的基因的擴(kuò)增和表達(dá) 。 [解析 ] 分析以上 4個 DNA片段 ， 可清楚分析出 ①③ 為平末端 ， 連接酶應(yīng)用 T4DNA連接酶； ②④ 為黏性末端且相同 ， 連接時應(yīng)用 E它是一種裸露的、 ○27 ________ 、 ○28 ______