【正文】 接導(dǎo)入cDNA文庫(kù)某種生物某個(gè)時(shí)期的 mRNA 某生物體內(nèi)全部 DNA 許多 DNA片段受體菌群體限制酶基因組文庫(kù)與運(yùn)載體 連接導(dǎo)入基因組文庫(kù)與 cDNA文庫(kù)的比較文庫(kù)類型 cDNA文庫(kù) 基因組文庫(kù)文庫(kù)大小基因中啟動(dòng)子（具有啟動(dòng)作用的 DNA片段）基因中內(nèi)含子(位于編碼蛋白質(zhì)序列的非編碼 DNA片段）基因多少 物種間的基因交流小 大無(wú) 有無(wú) 有某種生物的部分基因 某種生物的全部基因可以 部分基因可以（二）利用 PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因1 概念：PCR全稱為 _______________，是一項(xiàng)在生物_____復(fù)制 ______________的核酸合成技術(shù)?；虮磉_(dá)載體的構(gòu)建過程質(zhì)粒 DNA分子限制酶處理兩個(gè)切口獲得目的基因DNA連接酶重組 DNA分子（重組質(zhì)粒）同一種一個(gè)切口兩個(gè)黏性末端注意：① 載體 與 表達(dá)載體 的區(qū)別：二者都有標(biāo)記基因和復(fù)制原點(diǎn)兩部分 DNA片段。課堂練習(xí)基因工程是在、基因工程是在 DNA分子水平上進(jìn)行設(shè)計(jì)施工分子水平上進(jìn)行設(shè)計(jì)施工的。 氫鍵 單鏈 DNA雙鏈 DNADNA單鏈 ：每重復(fù)一次，目的基因增加 ___倍1PCR反應(yīng)原理示意圖：PCR反應(yīng)原理示意圖：PCR技術(shù)的操作過程PCR反應(yīng)體系中目的基因成反應(yīng)體系中目的基因成 指數(shù)指數(shù) (2n)形式擴(kuò)增形式擴(kuò)增思考？1個(gè) DNA分子進(jìn)行 PCR擴(kuò)增 ,循環(huán) 4次，理論上至少需要幾個(gè)引物？2（ 2n1） (n為 循 環(huán) 次數(shù) )（ 241） 2=30PCR技術(shù)擴(kuò)增與 DNA復(fù)制的比較DNA復(fù)制 PCR技術(shù)場(chǎng)所原理?xiàng)l件解旋方式酶特點(diǎn)結(jié)果堿基互補(bǔ)配對(duì)原則 堿基互補(bǔ)配對(duì)原則四種脫氧核苷酸、模板、酶、 ATP四種脫氧核苷酸、模板、酶、 引物DNA在高溫下解旋解旋酶催化解旋半保留復(fù)制、邊解旋變復(fù)制半保留復(fù)制、全解旋再?gòu)?fù)制體外復(fù)制主要在細(xì)胞核內(nèi)大量的 DNA片段形成整個(gè) DNA分子熱穩(wěn)定的 DNA聚合酶細(xì)胞內(nèi)的解旋酶、 DNA聚合酶等3. 人工合成法在基因較小，核苷酸序列已知的情況下，可以利用 DNA合成儀用化學(xué)方法人工合成蛋白質(zhì)的氨基酸序列mRNA的核苷酸序列基因的核苷酸序列目的基因化學(xué)合成推測(cè)推測(cè)思考： 化學(xué)法合成的目的基因含 內(nèi)含子、啟動(dòng)子和終止子嗎？不含課堂小結(jié)目的基因的獲取從基因文庫(kù)中獲取利用 PCR技術(shù)擴(kuò)增人工合成種類基因組文庫(kù)部分基因文庫(kù)二、基因表達(dá)載體的構(gòu)建 ——基因工程的核心1 目的：使目的基因在受體細(xì)胞中 穩(wěn)定存在 ，并且可以 遺傳 給下一代，同時(shí)使