【正文】 3’→5 ’的核酸外切酶活性和校正功能， 因此 ? 與其它 DNA聚合酶（如 Taq酶 ）相比，具有相對(duì)較好的高保真性，其 ? 出錯(cuò)率為 X 10–5 X 10–5 ； ? Vent DNA聚合酶（ Thermococcus litoralis） ? 度小于 2 kb時(shí)，擴(kuò)增產(chǎn)物的長(zhǎng)度與 Mg2+的濃度并無(wú)關(guān)聯(lián)； 如果擴(kuò)增長(zhǎng)度大于 2 kb， 則需要高于 2 mM的 Mg2+，而在擴(kuò)增長(zhǎng) 如果模板鏈中存在次黃嘌呤核苷或脫氧尿嘧啶核苷， Vent DNA ? 聚合酶不能延伸引物。 ? 單一核苷酸引物延伸法 :檢測(cè)產(chǎn)物是否存在已知點(diǎn)突變 吸附后標(biāo)記的單核苷酸延伸 PCROLA（寡核苷酸連接實(shí)驗(yàn)）：帶親合抗體產(chǎn)物與靶分子結(jié)合接近而被連接酶連接，從而與酶標(biāo)板上的抗原結(jié)合 ? 列出四種鑒定親緣關(guān)系或進(jìn)化關(guān)系的方法，原理 ? 若可得恐龍的 DNA ,如何通過(guò) PCR和基因克隆檢測(cè)恐龍是溫血或變溫爬行動(dòng)物 ? 列出四種鑒定親緣關(guān)系或進(jìn)化關(guān)系的方法，原理 ? rDNA、 RFLP、 RAPD、 SSR(ISSR)、 DNA fingerprinting ? 若可得恐龍的 DNA ,如何通過(guò) PCR和基因克隆檢測(cè)恐龍是溫血或變溫爬行動(dòng)物 ? 酶的克隆和表達(dá) 酶的熱穩(wěn)定性和最適溫度檢測(cè)和比較 溫血?jiǎng)游锏姆秶鷱V 復(fù)習(xí)提綱 什么是 PCR?其原理什么？ PCR反應(yīng)的典型過(guò)程怎樣？ PCR反應(yīng)中的引物設(shè)計(jì)有什么樣的原則？ 什么是熱啟動(dòng)？ 用于 PCR的幾種 DNA 聚合酶有什么樣的特性？ PCR反應(yīng)中對(duì)金屬離子和模板的要求是什么？ 難于擴(kuò)增得到長(zhǎng)片段產(chǎn)物的原因及其解決辦法。 Taq DNA聚合酶催化的聚合反應(yīng)的 ? 的可能性，則 Taq DNA酶還常常導(dǎo)致擴(kuò)增產(chǎn)物的缺失突變。 ? Taq DNA聚合酶（ Thermus aquaticus） ? 普遍錯(cuò)誤類型是由 AT轉(zhuǎn)換為 GC；如果模板 DNA具有形成二級(jí)結(jié)構(gòu) 避免稀釋保存 Taq DNA聚合酶 Taq DNA聚合酶在室溫下也具有延伸引物的活性 (Hot Start) ? Taq DNA酶在使用時(shí)應(yīng)注意： ? 用于 PCR的 DNA聚合酶簡(jiǎn)介 ? KlenTaq DNA聚合酶 是一種 N端缺失了 的 Taq DNA聚合酶，因而 ? 沒(méi)有 5’的核酸外切酶活性； ? KlenTaq DNA聚合酶 的 Mg2+最佳濃度范圍很寬，因此很容易優(yōu)化 ? KlenTaq DNA聚合酶（ Thermus aquaticus） ? 在最佳反應(yīng)條件下， KlenTaq DNA聚合酶 出錯(cuò)率為 X 10–5， ? 性能略優(yōu)于 Taq DNA聚合酶。 什么是平臺(tái)效應(yīng)？其產(chǎn)生的原因是什么？ 如何進(jìn)行 PCR 污染的控制？ 如何判斷 PCR產(chǎn)物的特異性？ 利用 PCR技術(shù)如何進(jìn)行點(diǎn)突變？ 1什么是錨定 PCR？應(yīng)用于怎樣的研究？ 1什么是不對(duì)稱 PCR？應(yīng)用于怎樣的研究？ 1什么是表達(dá)子 PCR? 應(yīng)用于怎樣的研究？ 1什么是反向 PCR？應(yīng)用于怎樣的研究？ 1什么是原位 PCR? 應(yīng)用于怎樣的研究？ 1什么是 RAPD？應(yīng)用于怎樣的研究？ 1如何進(jìn)行 PCR產(chǎn)物的分析？ 。 ? Tth DNA聚合酶在較高的溫度下仍具有逆轉(zhuǎn)錄酶活性，因此 能很 ? 用于 PCR的 DNA聚合酶簡(jiǎn)介 ? Pfu是一種 高保真的 DNA聚合酶，出錯(cuò)率極低； ? Pfu DNA聚合酶擴(kuò)增出