中國(guó)海洋大學(xué)基因工程l4第二章pcr技術(shù)-全文預(yù)覽
【正文】 5 direction pointing away from the repeat element. (B) A single such primer can be used in a PCR reaction to amplify sequences located between two Alu repeats which are in opposite orientation, and arranged such that the two bound primers are convergent (. PCR with primer 2 alone can amplify sequence X but not Y or Z。如果兩條被擴(kuò)增片段大小相同，電泳后可見一 條紅綠互補(bǔ)色 黃色帶。 什么是平臺(tái)效應(yīng)？其產(chǎn)生的原因是什么？ 如何進(jìn)行 PCR 污染的控制？ 如何判斷 PCR產(chǎn)物的特異性？ 利用 PCR技術(shù)如何進(jìn)行點(diǎn)突變？ 1什么是錨定 PCR？應(yīng)用于怎樣的研究？ 1什么是不對(duì)稱 PCR？應(yīng)用于怎樣的研究？ 1什么是表達(dá)子 PCR? 應(yīng)用于怎樣的研究？ 1什么是反向 PCR？應(yīng)用于怎樣的研究？ 1什么是原位 PCR? 應(yīng)用于怎樣的研究？ 1什么是 RAPD？應(yīng)用于怎樣的研究？ 1如何進(jìn)行 PCR產(chǎn)物的分析？ 。此時(shí)，擴(kuò)增產(chǎn)物無論大小，只要均被擴(kuò)增，就可見 一條紅綠互補(bǔ)的黃色條帶。如果僅有一條片段被擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物激發(fā)后，只有 一種顏色（紅色或綠色）。雙聚合酶 消除錯(cuò)配 ） or合成能力強(qiáng)酶 (Tth) ? *Tricine（三羥甲基甘胺酸） pH穩(wěn)定性 ? PCR buffer ? 、 KCl ? dNTP 20200?mol/L ? 四、平臺(tái)效應(yīng)： ? PCR 反應(yīng)后期循環(huán)產(chǎn)物對(duì)數(shù)累積趨于飽和，伴隨~1pmol靶序列的增加。 ? Tth DNA聚合酶在較高的溫度下仍具有逆轉(zhuǎn)錄酶活性，因此 能很 ? 用于 PCR的 DNA聚合酶簡(jiǎn)介 ? Pfu是一種 高保真的 DNA聚合酶，出錯(cuò)率極低； ? Pfu DNA聚合酶擴(kuò)增出的產(chǎn)物帶有平頭末端； ? Pfu DNA聚合酶擴(kuò)增速度極快，達(dá) 2 kb / min ； ? Pfu DNA聚合酶（ Pyrococcus furiosus） ? Pfu DNA聚合酶的熱穩(wěn)定性很高。然而通過優(yōu)化反應(yīng)條件，可使 Taq酶 ? 的聚合出錯(cuò)率降低到原來的 1/3。 ? 定義：在體外的無細(xì)胞體系中模擬天然 DNA復(fù)制過程的使目的 DNA的量增加的反應(yīng)。 ? 1985年 ，美國(guó) PEcetus公司人類遺傳研究室的 ? Kary Mullis發(fā)明了具有劃時(shí)代意義的 PCR技術(shù)； ? 1988年 ，美國(guó) PEcetus公司推出世界上第一臺(tái) ? PCR熱循環(huán)儀，從而使 PCR反應(yīng)自動(dòng)化； ? 1993年 ， Kary Mullis因發(fā)明 PCR技術(shù)獲得諾貝 ? 爾化學(xué)獎(jiǎng)； ? 1995年 ，定量 PCR儀誕生，使定量研究 DNA靶序列成為現(xiàn)實(shí)。 DNA聚合 ? 酶的堿基摻入錯(cuò)誤可能發(fā)生在其延伸階段的五種活性： ? 與 dNTP的結(jié)合特異性 ? 磷酸二酯鍵的形成速率 ? 焦磷酸的釋放速率 ? 堿基錯(cuò)誤摻入之后的持續(xù)延伸性 ? 3’→5’ 的核酸外切活性的強(qiáng)弱 ?用于 PCR的 DNA聚合酶簡(jiǎn)介 Klenow Thermus aquaticus 72?C 35100nt/s/mol The large spring above, near Great Fountain Geyser, Ye
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