中國海洋大學(xué)基因工程l4第二章pcr技術(shù)(參考版)
2024-09-22 20:32本頁面
【正文】 什么是平臺效應(yīng)？其產(chǎn)生的原因是什么？ 如何進(jìn)行 PCR 污染的控制？ 如何判斷 PCR產(chǎn)物的特異性？ 利用 PCR技術(shù)如何進(jìn)行點突變？ 1什么是錨定 PCR？應(yīng)用于怎樣的研究？ 1什么是不對稱 PCR？應(yīng)用于怎樣的研究？ 1什么是表達(dá)子 PCR? 應(yīng)用于怎樣的研究？ 1什么是反向 PCR？應(yīng)用于怎樣的研究？ 1什么是原位 PCR? 應(yīng)用于怎樣的研究？ 1什么是 RAPD？應(yīng)用于怎樣的研究？ 1如何進(jìn)行 PCR產(chǎn)物的分析？ 。此時，擴增產(chǎn)物無論大小，只要均被擴增，就可見 一條紅綠互補的黃色條帶。如果兩條被擴增片段大小相同，電泳后可見一 條紅綠互補色 黃色帶。如果僅有一條片段被擴增，擴增產(chǎn)物激發(fā)后，只有 一種顏色（紅色或綠色）。 1 2 3 4 Template + + + Primer1 + + + Primer2 + + + Verification of PCR products ? 六、 PCR污染控制 ? 設(shè)陰陽對照 ? 操作分區(qū) ? 材料分裝 ? 防汽溶膠 ? 加樣順序 ? 使用專門儀器 ? 重復(fù) ? 七、 PCR技術(shù)應(yīng)用 ? 點突變技術(shù) ? 錨定 PCR（ anchored PCR APCR） ? 不對稱 PCR（ asymmetry PCR） ? 引物比例 1： 100 ? 表達(dá)子 PCR(expressioncassette PCR ECPCR） ? 酶切位點 克隆 ? 噬菌體啟動子 單鏈探針 ? 蛋白質(zhì)結(jié)合位點 產(chǎn)物純化、檢測 PCR技術(shù) 點突變 APCR ? 反向 PCR(inverse PCR） ? 原位 PCR ? RAPD(Random Amplification Polymorphic DNAs) ? 原理 引物 條件 應(yīng)用 ? 其它 ? 七、 PCR擴增產(chǎn)物的分析 ? 凝膠電泳 ? 雜交 ? 微孔板夾心雜交法（特異性高） :通過一固定于微孔板的捕獲探針與 PCR產(chǎn)物的某一區(qū)域特 異雜交使產(chǎn)物間接地固定于微孔板上，然后，再 利 用一生物素 等非放射性標(biāo)記物標(biāo)記的檢測探針與產(chǎn)物的另一 區(qū)域的 特異性 進(jìn)行 一次 雜交 ， 顯色 后 即可判斷結(jié)果 . 反向 PCR Figure . Vectorette (bubble linker) PCR permits amplification of uncharacterized sequences flanking a known DNA sequence. Note that the vectorettes contain plementary sequences at their ends but unrelated sequences within the bubble. A restriction fragment containing a known sequence A flanked by uncharacterized regions X and Y is ligated to a vectorette linker
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