中國海洋大學(xué)基因工程l4第二章pcr技術(shù)-預(yù)覽頁
【正文】 llowstone, was the source of the culture of Thermus Aquaticus Taq , discovered by Thomas Brock, U. Wisconsin in 1968). ? Taq DNA酶的聚合出錯率較高（ ），因為它沒有 3’→5’ 的 ? 的核酸外切酶活性和校正功能。 ? 反應(yīng)條件； ? 用于 PCR的 DNA聚合酶簡介 ? Tth DNA聚合酶在 Mn2+的存在下，能有效地反轉(zhuǎn)錄長度在 1000堿 ? 基以下的 RNA； ? Tth DNA聚合酶在 Mg2+的存在下，能由 DNA模板合成 DNA； ? Tth DNA聚合酶（ Thermus thermophilus） ? 好地克服 RNA鏈中普遍存在二級結(jié)構(gòu)的難題。 C 1/100kb/min 1/20~30kb/min ? *反應(yīng)添加劑、 PCR循環(huán)參數(shù)、模板完整性 ? *Taq酶 自動脫落 ? 改進辦法 : ? *發(fā)展新酶（ pfu、 Ventamp。 primer 1 alone can amplify sequence Y but not X or Z). A bination of primers 1 and 2 should, in theory, permit amplification of sequences between repeats in the same orientation. In practice, PCR amplification may be difficult or impossible if the distance between the repeats is too great PCRELISA(Enzyme Linkage Immunosorbent assay) Schematic of PCR ELISA procedure. Step 1: Labeling of PCR product with digoxigenin during an amplification reaction in the presence of digoxigenin11dUTP (DIGdUTP). Step 2: Denaturation of PCR product and hybridization to a biotinlabeled capture probe. The capture probe specifically recognizes an internal sequence of the target DNA. Step 3: Immobilization of biotinlabeled hybrid on a streptavidincoated microplate, followed by washes that remove unhybridized, nonspecific amplification products. Step 4: Detection of bound hybrids with peroxidaseconjugated antidigoxigenin antibody (AntiDIGPOD) and the colorimetric peroxidase substrate ABTS. ? 顏色互補分析 :顏色互補分析法是利用三原色原理，當不同 DNA片段（ A和 B）同時擴增時，用引 物 5’端修飾技術(shù)將不同引物用不同顏色熒光素標記（ A片段引物標記綠色的熒 光素， B標記紅色的羅丹明）。如果不用電泳法分離擴增片段，通過一定手段除未摻入引 物，亦可觀察到擴增產(chǎn)物
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