中國海洋大學(xué)基因工程l4第二章pcr技術(shù)-免費閱讀
【正文】 如果不用電泳法分離擴增片段，通過一定手段除未摻入引 物，亦可觀察到擴增產(chǎn)物的顏色。 C 1/100kb/min 1/20~30kb/min ? *反應(yīng)添加劑、 PCR循環(huán)參數(shù)、模板完整性 ? *Taq酶 自動脫落 ? 改進辦法 : ? *發(fā)展新酶（ pfu、 Ventamp。 DNA聚合 ? 酶的堿基摻入錯誤可能發(fā)生在其延伸階段的五種活性： ? 與 dNTP的結(jié)合特異性 ? 磷酸二酯鍵的形成速率 ? 焦磷酸的釋放速率 ? 堿基錯誤摻入之后的持續(xù)延伸性 ? 3’→5’ 的核酸外切活性的強弱 ?用于 PCR的 DNA聚合酶簡介 Klenow Thermus aquaticus 72?C 35100nt/s/mol The large spring above, near Great Fountain Geyser, Yellowstone, was the source of the culture of Thermus Aquaticus Taq , discovered by Thomas Brock, U. Wisconsin in 1968). ? Taq DNA酶的聚合出錯率較高（ ），因為它沒有 3’→5’ 的 ? 的核酸外切酶活性和校正功能。 ? 定義：在體外的無細胞體系中模擬天然 DNA復(fù)制過程的使目的 DNA的量增加的反應(yīng)。 ? Tth DNA聚合酶在較高的溫度下仍具有逆轉(zhuǎn)錄酶活性，因此 能很 ? 用于 PCR的 DNA聚合酶簡介 ? Pfu是一種 高保真的 DNA聚合酶，出錯率極低； ? Pfu DNA聚合酶擴增出的產(chǎn)物帶有平頭末端； ? Pfu DNA聚合酶擴增速度極快，達 2 kb / min ； ? Pfu DNA聚合酶（ Pyrococcus furiosus） ? Pfu DNA聚合酶的熱穩(wěn)定性很高。如果僅有一條片段被擴增，擴增產(chǎn)物激發(fā)后，只有 一種顏色（紅色或綠色）。 什么是平臺效應(yīng)？其產(chǎn)生的原因是什么？ 如何進行 PCR 污染的控制？ 如何判斷 PCR產(chǎn)物的特異性？ 利用 PCR技術(shù)如何進行點突變？ 1什么是錨定 PCR？應(yīng)用于怎樣的研究？ 1什么是不對稱 PCR？應(yīng)用于怎樣的研究？ 1什么是表達子 PCR? 應(yīng)用于怎樣的研究？ 1什么是反向 PCR？應(yīng)用于怎樣的研究？ 1什么是原位 PCR? 應(yīng)用于怎樣的研究？ 1什么是 RAPD？應(yīng)用于怎樣的研究？ 1如何進行 PCR產(chǎn)物的分析？ 。 1 2 3 4 Template + + + Primer1 + + + Primer2 + + + Verification of PCR products ? 六、 PCR污染控制 ? 設(shè)陰陽對照 ? 操作分區(qū) ? 材料分裝 ? 防汽溶膠 ? 加樣順序 ? 使用專門儀器 ? 重復(fù) ? 七、 PCR技術(shù)應(yīng)用 ? 點突變技術(shù) ? 錨定 PCR（ anchored PCR APCR） ? 不對稱 PCR（ asymmetry PCR）
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