【正文】 料的局限性 ? 了解溶劑對(duì)樣品的溶解性及分離的影響 ? pH ? 溫度 ? 化學(xué)兼容性 ? 在使用前過濾溶劑 友情警示： 使用緩沖液的注意事項(xiàng) 緩沖液可以提供離子平衡的反離子，并使流動(dòng)相保持一定的離子強(qiáng)度和 pH值，減少拖尾。 ? 色譜柱的壓力不要太高。 ? 保留時(shí)間的漂移往往由柱老化引起；而柱老化不可能引起保留時(shí)間的無規(guī)律波動(dòng)。通常通過實(shí)驗(yàn)可判斷污染的來源。此現(xiàn)象是由流動(dòng)相不浸潤固定相表面而致。 DMSO常常用于去除反相色譜柱中的蛋白。雙官能團(tuán)配體和三官能團(tuán)配體比單官能團(tuán)配體的鍵合相要穩(wěn)定；長鏈鍵合相要比短鏈鍵合相穩(wěn)定；烷基鍵合相比氰基鍵合相穩(wěn)定的多。 Temp: ~80℃ A: % TFA in water B: % TFA in acetonitrile 100% A for 30 min.。 ? 避免使用高粘度的流動(dòng)相。利用成功的故障排除經(jīng)驗(yàn)。但是使用緩沖液要注意幾點(diǎn)： 避免使用鹽酸鹽，鹽酸鹽對(duì)鋼質(zhì)有腐蝕作用。即不要使用受污染、老化的色譜柱。 ? 事實(shí)上，保留時(shí)間漂移的多半原因是不同機(jī)理的色譜柱老化 ，如固定相流失（例如通過水解），色譜柱污染（由樣品或流動(dòng)相所致）等。 ? 樣品中如果存在色譜柱上保留很強(qiáng)的組分，就可能是使保留時(shí)間漂移的潛在根源。挽救的辦法實(shí)現(xiàn)用含大量有機(jī)組分的流動(dòng)相浸潤固定相，再用高水含量的流動(dòng)相進(jìn)行平衡。如 THF可去除反相色譜柱中的許多污染物，但蛋白在 THF中就不能溶解。 ? 水解速度與流動(dòng)相類型和配體有關(guān)。 色譜柱的修復(fù)和再生 － 化學(xué)變化 2 Example: mm ID x 15 cm Zorbax 300SBC18 Flow rate: 1 mL / min。 ? 避免使泵長期不工作，使流動(dòng)相干枯。 嘗試預(yù)測將來可能發(fā)生的問題。 緩沖液最好要現(xiàn)配現(xiàn)用，往往緩沖液是良好的菌類培養(yǎng)液，隔天或放置長時(shí)間實(shí)驗(yàn)時(shí)會(huì)有很多怪現(xiàn)象發(fā)生。 ? 使用帶緩沖鹽的流動(dòng)相后一定要用純水充分清洗。 保留時(shí)間不重現(xiàn)的因素 ? 保留時(shí)間漂移的幾種最常見的原因如下： ? 一 、色譜柱的平衡 ? 二 、固定相穩(wěn)定性 ? 三 、色譜柱污染 ? 四 、流動(dòng)相的組成 ? 五 、疏水坍塌 保留時(shí)間不重現(xiàn)的因素與排除 一、色譜柱的平衡 ? 如果我們觀察到保留時(shí)間漂移，首先應(yīng)考慮色譜柱是否已用流動(dòng)相完全平衡。這些根源通常是樣品基質(zhì)。 保留時(shí)間不重現(xiàn)的因素與排除 ? 色譜柱長期儲(chǔ)存也會(huì)發(fā)生此現(xiàn)象。通常使用在給定色譜條件下的強(qiáng)溶劑，但并非所有污染物都可以在流動(dòng)相中溶解。例：硅膠基質(zhì)在 pH4時(shí)水解穩(wěn)定性最好。 ?XDB, 有機(jī)聚合物等填料可使用高 pH 水溶液 /有機(jī)溶液，如： NaOH 50% 異丙醇 /水溶液，硅膠基質(zhì)應(yīng)盡量減少接觸時(shí)間 (1530 min)。 HPLC 常見故障因素（泵） LCP100 高壓恒流泵 HPLC 常見故障因素（泵） 正確使用您的色譜泵： ? 使用高品質(zhì)的溶劑 ? 溶劑過濾（注意濾膜的選擇） ? 脫氣溶劑 ? 柱塞桿清洗 ? 注意調(diào)節(jié)流量時(shí)的變化速度 HPLC 常見故障因素（泵） ?注意流動(dòng)相組分 的互溶性！ ?使用正確的密封 圈清洗溶劑！ 泵 頭 泵腔體 吸入閥導(dǎo)通 活塞向后運(yùn)動(dòng) 泵 座 寶石活塞桿 密封圈 排出閥關(guān)閉 液流方向 泵的工作原理： ① 吸液過程 泵 頭 泵腔體 吸入閥關(guān)閉 活塞向前運(yùn)動(dòng) 泵 座 寶石活塞桿 密封圈 排出閥導(dǎo)通 液流方向 泵的工作原理： ② 排液過程 HPLC 常見故障因素（泵頭） 柱塞桿 密封圈 HPLC 常見故障因素（泵頭） 出口單向閥 進(jìn)口單向閥 泵頭 泵 頭 吸入閥寶石球與球坐粘連，吸入閥不能導(dǎo)通 活塞向后運(yùn)動(dòng) 泵 座 排出閥關(guān)閉 液流方向 泵吸液過程有故障情況： 吸入閥寶石球粘連 泵腔體內(nèi)沒有液體流入 寶石活塞桿 密封圈 排出閥導(dǎo)通 泵 座 寶石活塞桿 密封圈 吸入閥寶石球與球座之