【正文】 保留時(shí)間不重現(xiàn)的因素與排除 ? 四 、流動(dòng)相的組成 ? 流動(dòng)相組成的緩慢變化也是保留時(shí)間漂移的常見原因。 保留時(shí)間不重現(xiàn)的因素與排除 三 、色譜柱污染 ? 保留時(shí)間漂移的另一個(gè)常見原因是色譜柱污染。) 色譜柱需保存在有機(jī)溶劑中 (乙腈 ) 關(guān)于保留時(shí)間漂移的專題討論 保留時(shí)間不重現(xiàn) ? 保留時(shí)間不重現(xiàn)有兩種不同的情況： ? 保留時(shí)間漂移：保留時(shí)間僅沿單方向發(fā)生變化。 吸入單向閥故障的排除 ? 單向閥的故障現(xiàn)象，極大多數(shù)出現(xiàn)在吸入單向閥上。否則，換下來的組件將來很難再利用， 造成浪費(fèi)。 確認(rèn)問題至少發(fā)生兩次以上?？梢詫⑽雴蜗蜷y從泵頭上拆下，接上專用針頭，用蒸餾水沖洗即可（沖水時(shí)注意手指要按住吸入閥頭部白色墊圈，防止內(nèi)部零件沖出）。 ? 保留時(shí)間波動(dòng)：保留時(shí)間無固定規(guī)律的波動(dòng)。 ? HPLC色譜柱是非常有效的吸附性過濾器，它可以過濾并吸附流動(dòng)相攜帶的任何物質(zhì)。如流動(dòng)相中易揮發(fā)組分的揮發(fā)及循環(huán)使用流動(dòng)相等。 反沖色譜柱僅是不得已時(shí)采用的辦法。其他硅膠基質(zhì)鍵合相在水溶液環(huán)境中也可以發(fā)生水解，如氨基鍵合相等。 Hold 100% B for 30 min., Return to 100% A in 5 min. Repeat 3 times. 總 結(jié) 如果使用時(shí)加以注意，大部分的液相色譜柱的問題是可以預(yù)防的 流動(dòng)相必須是互溶的，無顆粒 使用保護(hù)柱和在線過濾器，并定期更換 使用恰當(dāng)?shù)臉悠分苽浞椒? 使用恰當(dāng)?shù)纳V柱清洗程序 不同類型的色譜柱，請(qǐng)選擇不同的操作條件 (如： SB: pH 16, XDB: pH 311) 保存柱反壓及重要的色譜參數(shù)的記錄 (如： R, N, As, k39。 ? 定期對(duì)流動(dòng)相過濾頭進(jìn)行清洗。如果使用更換組件的方法來查找問題之所在，完畢后應(yīng) 將原有完好組件安裝回原處。如果問題不重復(fù)出現(xiàn)，很難證實(shí)其確 實(shí)存在。 泵 頭 吸入閥關(guān)閉 泵 座 寶石活塞桿 密封圈 排出閥導(dǎo)通 液流方向 （壓力下降） 密封圈泄漏產(chǎn)生的故障現(xiàn)象： 密封圈與寶石桿之間存在間隙，導(dǎo)致漏液和壓力下降 泵腔體 活塞向前運(yùn)動(dòng) 如何減少密封圈的磨損 ? 要用優(yōu)質(zhì)的流動(dòng)相。 保留時(shí)間不重現(xiàn)的原因分析 ? 將上述兩種情況區(qū)分開來對(duì)找到問題的原因往往很有幫助。污染源可以是：流動(dòng)相本身，流動(dòng)相容器，連接管、泵、進(jìn)樣器、儀器密封墊以及樣品等。 保留時(shí)間不重現(xiàn)的因素與排除 ? 五 、疏水坍塌 ? 當(dāng)小孔徑、端基封口良好的反相填料色譜柱使用接近 100%的水為流動(dòng)相時(shí)，有時(shí)會(huì)發(fā)生分離突然喪失及被分析物質(zhì)保留明顯降低或完全不保留的現(xiàn)象，這就是疏水坍塌。 ? 使用保護(hù)柱是個(gè)非常有效的方法。 ? 如經(jīng)常清洗色譜柱會(huì)加速色譜柱固定相的水解。 0100% B over 30 min.。 ? 使用帶緩沖鹽的流動(dòng)相后，一定要充分清洗。 恢復(fù)原狀。 色譜故障排除經(jīng)驗(yàn)規(guī)則 引起 HPLC發(fā)生問題的潛在因素 HPLC 常見故障因素 環(huán) 境 電源 接地線 溫度 濕度 清潔程度 化學(xué)品 色譜柱 保護(hù)柱 溶劑 樣品 儀 器 泵 進(jìn)樣器 檢測(cè)器 數(shù)據(jù)處理單元 HPLC 常見故障因素（工作環(huán)境） ? 電源 容量、穩(wěn)定性 ? 地線 系統(tǒng)統(tǒng)一電源 ,統(tǒng)一接地 ? 濕度 對(duì)光學(xué)部件的影響尤為嚴(yán)重 ? 溫度 空調(diào)機(jī)的影響 ? 清潔 不要輕視灰塵的影響 工作環(huán)境的影響 HPLC 常見故障因素（化學(xué)品） ? 已損壞的保護(hù)柱、色譜柱 ? 所用溶劑、試劑的品質(zhì) ? 化學(xué)品使用不當(dāng)帶來的影響 ? 樣品前處理方法不當(dāng)帶來的影響 ? 實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備和結(jié)束后的收尾工作 化學(xué)品的影響 友情提示：保持良好的色譜柱使用習(xí)慣 ? 使用新鮮的水溶液，并考慮使用生物穩(wěn)定劑（如疊氮化鈉） ? 儲(chǔ)存色譜柱時(shí)，應(yīng)沖凈緩沖鹽，并用有機(jī)溶劑保護(hù)色譜柱（乙腈） ? 避免外力損傷色譜柱：彎曲、跌落或?qū)⒔宇^擰的過緊 ? 完全潤濕在運(yùn)輸中變干的色譜柱 ? 對(duì)含有保留性較強(qiáng)的雜質(zhì)組分的樣品要進(jìn)行預(yù)處理 ? 定期用強(qiáng)極性的溶劑清洗色譜柱 ? 清除柱填