重亞硫酸鹽測(cè)序技術(shù)介紹(留存版)
【正文】 于一身，能定量檢測(cè)微量 DNA樣品特定基 因位點(diǎn)的甲基化狀態(tài)，但由于涉及 PCR和限制性酶 的使用，通常只能分析一個(gè)特定的序列 SSCP ?將亞硫酸氫鹽處理和單鏈構(gòu) 象多態(tài)性PCR(PCR． SSCP)結(jié)合起來，設(shè)計(jì)了針對(duì) 轉(zhuǎn)化后 DNA序列的引物，同時(shí)擴(kuò)增未甲基化和甲 基化的 DNA，由此產(chǎn)生的兩種不同的擴(kuò)增產(chǎn)物可以 通過 SSCP區(qū)分。甲基胞嘧啶，脫氨基后形成胸腺嘧啶，由于 T本身就會(huì)存在于 DNA中，因此不易被修復(fù)，所以被淘汰。大多數(shù)脊椎動(dòng)物基因組 DNA都有少量的甲基化胞嘧啶，主要集中在基因 5＇端的非編碼區(qū)，并成簇存在。 ? 缺點(diǎn)：它的不足是耗費(fèi)時(shí)間和耗資過多，至少要測(cè)序 10個(gè)以上的克隆才能獲得可靠數(shù)據(jù)，需要大量的克隆及質(zhì)粒提取測(cè)序，過程較為繁瑣、昂貴。 啟動(dòng)子的甲基化能抑制基因的表達(dá)。最后，對(duì) PCR產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序，并且與未經(jīng)處理的序列比較，判斷是否 CpG位點(diǎn)發(fā)生甲基
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