【正文】 oactive isotope, fluorescence tag or an enzyme Dectection: autoradiography, fluorescence microscope, enzymesubstrate reaction 原位探測基因表達(dá) 原位探測基因表達(dá) Distribution of mRNA for the growth factor Vg1 in the amphibian egg. In situ hybridization with a radioactive probe. (yellow signals) 原位探測基因表達(dá) 利用原位雜交技術(shù)研究基因表達(dá)的時空譜 mRNA的檢測 FISH 探測基因表達(dá) 報道基因 (reporter gene) 技術(shù) 目的： 用于啟動子 /增強(qiáng)子的分析研究。 ? 化學(xué)誘變或射線突變：定位克隆 (positional cloning)—根據(jù)目的基因在染色體上的位置進(jìn)行基因分離的。 2. 嗎啉代寡聚核苷酸 (MO): 利用反義寡聚核苷酸抑制特定 mRNA (5’UTR) 的翻譯而阻斷目的基因功能的方法。 2) 將外源基因轉(zhuǎn)化到 ES中，同 gene knockout 3) 小鼠雜交。果蠅中為 P因子，可以隨即插入基因組中，并可以在基因組中移動，包括特殊序列和轉(zhuǎn)座酶，后代生殖細(xì)胞中，轉(zhuǎn)座酶就會誘導(dǎo) P因子在基因中隨即轉(zhuǎn)座造成基因突變。 ? 細(xì)胞標(biāo)記技術(shù) 。采用一些產(chǎn)物易于檢測的基因 (報道基因 )與待研究的表達(dá)調(diào)控序列串聯(lián)，通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)導(dǎo)入胚胎體內(nèi)，分析報道基因產(chǎn)物的表達(dá)來研究目的片斷的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)活性。通過分析突變位點與已知分子標(biāo)記的連鎖關(guān)系來確定突變基因的染色體位置。主要應(yīng)用在斑馬魚和爪蟾研究中，但現(xiàn)在也用于 miRNA研究中。 Transgenic technique 1) 將外源基因注射到受精卵的細(xì)胞核中， 缺點是無法控制外源基因的插入情況， 只能通過后代檢查 DNA。突變后的蛋白質(zhì)比野生型活性差；某一蛋白質(zhì)完全失活的突變?yōu)闊o效突變 (null mutation) ? 功能獲得 ：如某些受體突變后活化 插入誘變篩選 利用 轉(zhuǎn)座子 (transposon)或病毒載體做誘變劑。 ? 報告基因技術(shù) 。 常用報道基因分類： ? 綠色熒光蛋白 (GFP): 分布用熒光顯微鏡觀察 ? lacZ基因 : 編碼 β半乳糖苷酶 , 用特異底物顯色研究其產(chǎn)物分布