【正文】 念 ：以恒定流速使?fàn)I養(yǎng)物質(zhì)濃度恒定而保持細(xì)菌生長(zhǎng)速率恒定的方法。 將定量的樣品通過(guò)薄膜（硝化纖維素薄膜、醋酸纖維薄膜）過(guò)濾，菌體被阻留在濾膜上，取下濾膜進(jìn)行培養(yǎng)，然后計(jì)算菌落數(shù)，可求出樣品中所含菌數(shù)。該方法要在顯微鏡下進(jìn)行。可以用重量、體積、密度或濃度來(lái)衡量。 特點(diǎn)： 快速，準(zhǔn)確，對(duì)酵母菌可同時(shí)測(cè)定出芽率，或在菌懸液中加入少量美藍(lán)可以區(qū)分死活細(xì)胞。 第二節(jié) 微生物的生長(zhǎng)曲線 一、微生物培養(yǎng) ： 研究群體生長(zhǎng)規(guī)律，首先應(yīng)對(duì)微生物進(jìn)行培養(yǎng)。 ? 生長(zhǎng)曲線可以細(xì)分為 六個(gè)階段 、 四個(gè)時(shí)期 ： 延遲期（停滯期）、加速期 、 對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期、 減速期、 穩(wěn)定期（靜止期） 、 衰亡期（或死亡期）。 產(chǎn)生原因： 生長(zhǎng)條件的進(jìn)一步惡化，使細(xì)胞內(nèi)的分解代謝大大超過(guò)合成代謝，繼而導(dǎo)致菌體的死亡 三 .絲狀微生物的群體生長(zhǎng)（不講） 絲狀微生物的純培養(yǎng)采用孢子接種，在液體培養(yǎng)基中震蕩培養(yǎng)或深層通氣加攪拌培養(yǎng)，菌絲體通過(guò)斷裂繁殖不形成產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)。 溫度對(duì)微生物的影響具體表現(xiàn)在： ? 影響酶活性。 菌 名 生長(zhǎng)溫度 發(fā)酵溫度 累積產(chǎn)物溫度 （ ℃ ） （ ℃ ） （ ℃ ） Streptococcus thermophilus 37 47 37 34 40 產(chǎn)細(xì)胞： 25~30 產(chǎn)乳酸： 30 Streptomyces griseus 37 28 _ Corenybacterium pekinense 32 33~35 _ Clostridium acetobutylicum 37 33 _ Penicilium chrysogenum 30 25 20 以青霉素的生產(chǎn)為例：培養(yǎng) 165小時(shí)采用 分段控制溫度 的方法，其青霉素產(chǎn)量比始終在 30 ℃ 培養(yǎng)提高了 %。 一些微生物的生長(zhǎng)酸堿度 ? 大多數(shù)細(xì)菌、藻類和原生動(dòng)物的最適pH為 ；放線菌在中性偏堿性的環(huán)境pH為 ，霉菌與酵母在酸性環(huán)境 pH為56和 36。 作用原理 ： 可 引起水和其他物質(zhì)的電離 ，產(chǎn)生游離基，使核酸、蛋白質(zhì)或酶發(fā)生變化，造成細(xì)胞損傷或死亡。實(shí)際上是利用自發(fā)突變（正變）不斷地從生產(chǎn)中選種。 最小抑制濃度 （ Minimal Inhibitory Concentration,MIC） :表示抗生素的抗菌活性，單位是 ?g/固體平板上測(cè)定， 抗菌譜： 抗生素的作用對(duì)象有一定范圍，這種作用范圍稱該抗生素的抗菌譜。 主要因?yàn)楹怂幔?DNA、 RNA）的吸收峰為 260nm， 蛋白質(zhì)的吸收峰為 280nm。 化療（ chemotheraphy） 即化學(xué)治療。 根據(jù)微生物的最適生長(zhǎng)溫度分類 嗜冷微生物 嗜溫微生物 嗜熱微生物 超嗜熱或嗜高溫微生物 微生物類型 最低溫度 oC 最適溫度 oC 最高溫度 oC 嗜冷微生物 50 510 2030 嗜溫微生物 510 2540 4550 嗜熱微生物 30 5060 7080 超嗜熱或嗜高溫微生物 55 70105 110113 嗜冷微生物嗜冷機(jī)制： ? 主要分布在地球的兩極、冷泉、深海、冷凍場(chǎng)所及冷藏食品中。利用對(duì)數(shù)期進(jìn)行廢水生物處理，雖然反應(yīng)速率快，但想取得穩(wěn)定的出水及較高的處理效果亦比較困難。 溶解氧供應(yīng)不足 應(yīng)用意義： 發(fā)酵生產(chǎn)形成的重要時(shí)期（抗生素、氨基酸等），生產(chǎn)上應(yīng)盡量延長(zhǎng)此期，提高產(chǎn)量，措施如下： ? 補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)（補(bǔ)料） ? 調(diào) pH ? 調(diào)整溫度 ④ . 衰亡期（ decline phase） 特點(diǎn)： ① 細(xì)胞死亡數(shù)增加，死亡數(shù)大大超過(guò)新增殖的細(xì)胞數(shù)，群體中的活菌數(shù)目急劇下降，出現(xiàn)“負(fù)生長(zhǎng)”。主要采用恒濁器，當(dāng)濁度高時(shí)，使新鮮培養(yǎng)基的流速加快，濁度降低，則減慢培養(yǎng)基的流速。 特點(diǎn)：快速、簡(jiǎn)便；但易受干擾。 直接法 (干重法，體積法 ) 2。 繁殖 —— 生命個(gè)體生長(zhǎng)到一定階段，通過(guò)特定方式產(chǎn)生新的生命個(gè)體，即引起生命個(gè)體數(shù)量增加的生物學(xué)過(guò)程。 二、微生物生長(zhǎng)量的測(cè)定方法 （一）微生物細(xì)胞數(shù)目的檢測(cè)法 1。 舉例：大腸桿菌一個(gè)細(xì)胞一般重約 10–12~10–13g，液體培養(yǎng)物中細(xì)胞濃度達(dá)到 2 109個(gè) /ml時(shí) ，100ml培養(yǎng)物可得 10~90mg干重的細(xì)胞 。 應(yīng)用范圍： 實(shí)驗(yàn)室科學(xué)研究及污水生物處理。 ③此時(shí)期的微生物開(kāi)始 合成次生代謝產(chǎn)物 ，對(duì)于發(fā)酵生產(chǎn)來(lái)說(shuō)，一般在穩(wěn)定期的后期產(chǎn)物積累達(dá)到高峰，是最佳的收獲時(shí)期。也分為三個(gè)時(shí)期： SBR（序批法間歇曝氣器）即是該原理的應(yīng)用。 微生物 ? 處于最適生長(zhǎng)溫度時(shí)，生長(zhǎng)速度最快，代時(shí)最短。分為巴斯德消毒和煮沸消毒法。 紫外線殺菌或誘變?cè)恚? ? 紫外線 作用于 DNA ，使其產(chǎn)生 胸腺嘧啶二聚體 ，引起 DNA結(jié)構(gòu)變形，阻礙正常的堿基配對(duì)，從而造成微生物 變異或死亡。 應(yīng)用： 食品消毒、滅菌 。 ?常用的菌種保藏機(jī)構(gòu) ： 中國(guó)微生物菌種保藏委員會(huì) (CCCCM) 美國(guó)的典型菌種保藏中心 (ATCC) 菌種保藏的原理 ?挑選典型菌種的優(yōu)良純種， 一般采用微生物的休眠體（如孢子、芽孢等）采用人工條件 （如干燥、低溫、缺氧、避光、缺乏營(yíng)養(yǎng)以及添加保護(hù)劑或酸堿中和劑等），使微生物代謝變?nèi)?，處?休眠狀態(tài) 。 超聲波 超聲波： 每秒鐘振動(dòng)在 1600以上的聲波。 微生物 生長(zhǎng)最適 pH 合成抗生素最適 pH 灰色鏈霉菌 ~ ~ 紅霉素鏈霉菌 ~ ~ 產(chǎn)黃青霉 ~ ~ 金霉素鏈霉菌 ~ ~ 龜裂鏈霉菌 ~ ~ 灰黃青霉 ~ ~ 生長(zhǎng)的最適 pH值與發(fā)酵的最適 pH值 三、氧化還原電位（ Eh） ? 氧化還原電位的單位是 V或 mV，一般 ? 好氧微生物： + V ? 最適 +~+ ? 厭氧微生物： 。 高溫與低溫對(duì)微生物的影響 高溫對(duì)微生物的影響 高溫下蛋白質(zhì)不可逆變性，膜受熱出現(xiàn)小孔，破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)（溶菌）。溫度高，流動(dòng)性大，有利于物質(zhì)的運(yùn)輸，溫度低，流動(dòng)性降低，不利于物質(zhì)運(yùn)輸，因此，溫度變化影響營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收與代謝產(chǎn)物的分泌。 迅速生長(zhǎng)期 :菌絲體干重迅速增加，其立方根與時(shí)間呈直線關(guān)系，菌絲干重不以幾何級(jí)數(shù)增加，沒(méi)有對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期。 ★ 影響延遲期長(zhǎng)短的因素： P116117 認(rèn)識(shí)延遲期的特點(diǎn)及形成原因?qū)?shí)踐的指導(dǎo)意義： ◆ 在工業(yè)上需設(shè)法盡量縮短延遲期； P117 采取的 縮短 lag phase 的 措施 有： ①增加接種量； （群體優(yōu)勢(shì) 適應(yīng)性增強(qiáng)） ②采用對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的健壯菌種； ③ 調(diào)整培養(yǎng)基的成分，在種子基中加入發(fā)酵培養(yǎng)基的某些成分。 (P116) 2 連續(xù)培養(yǎng)