【正文】 幾種： 1. 兔網(wǎng)織細(xì)胞裂解物 (reticylocyte lysate system) 由未成熟的兔紅細(xì)胞裂解而成，該種細(xì)胞是向動物 注射苯肼 后引起貧血產(chǎn)生的 ,向該系統(tǒng)加入血紅素基和能量物質(zhì)，裂解物中的內(nèi)源 mRNA可被翻譯成球蛋白 ，其合成速度與用完整細(xì)胞的合成速度接近。 5 39。 A39。C39。N n 39。A39。Kl en ow f ra g[ a p s ] d N T P339。 (maxicell system) 對紫外光敏感的 ，損傷的DNA會被大量降解，由于質(zhì)粒 DNA分子量小，可繼續(xù)存活。 用于細(xì)菌的噬菌斑 4. 凝膠電泳 對于自主復(fù)制型載體 , 可從轉(zhuǎn)化子中提取質(zhì)粒 DNA, 然后經(jīng)過電泳法進(jìn)一步證實 5. Southern雜交 對于整合型載體 , 則應(yīng)該利用 DNA雜交法證實 第七章 基 因 表 達(dá) 第一節(jié) 研究基因表達(dá)的方法 研究基因表達(dá)應(yīng)從以下幾個方面考慮： 1） 轉(zhuǎn)錄 ：起始，延長和終止。 微球菌核酸酶可除去內(nèi)源 mRNA，同時也不會對系統(tǒng)中的 tRNA和 rRNA 損傷過大。突起端 。C39。B39。和 339。C39。339。 因該系統(tǒng)無內(nèi)源核酸酶和蛋白酶，可用于大分子 mRNA 的翻譯。 一．基因?qū)敕椒? 1．細(xì)胞融合 106 2．微細(xì)胞介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移 小于或等于 106 3．染色體介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移 106利用中期染色體DNA進(jìn)行轉(zhuǎn)移 4．脂質(zhì)體介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移 約 2 104先用脂質(zhì)體包裝 DNA，然后與 細(xì)菌，植物原生質(zhì)體融合 5． 磷酸鈣沉淀介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)移 103— 107 6．原生質(zhì)體融合術(shù) 約 — %溶菌酶處理細(xì)菌，再與動物細(xì)胞，植物原生質(zhì)體融合 7．顯微注射法 約 1— 10%直接注射入細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞核內(nèi) 顯微注射法 — 利用顯微操縱器，將 DNA直接注射到細(xì)胞核中 穿刺法 — 利用注射顯微鏡將微注射針固定，然后穿刺將 DNA注入細(xì)胞核內(nèi) 顯微注射穿刺法 8． 電脈沖介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移 104利用電脈沖改變生物膜透性， DNA可直接進(jìn)入各種細(xì)胞 9． 重組 RNA病毒感染 約 10— 100%適用于動植物細(xì)胞 10． 重組 DNA病毒感染 約 100%適用于各種細(xì)胞 11． 直接轉(zhuǎn)化法 包括： 完整細(xì)胞或原生質(zhì)體 與 DNA直接接觸， DNA進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，這種方法適用于細(xì)菌，酵母菌，真菌和植物細(xì)胞。大多數(shù)的 λ蛋白質(zhì)合成可用宿主已有的溶源化 λ或攜帶的質(zhì)粒（含有 CI基因）抑制。539。A39。3 3 39。C39。C39。 3 39。 由于該系統(tǒng)存在著核酸酶和蛋白酶，因此不能用于翻譯很大的 mRNA ，該系統(tǒng)僅為前一系統(tǒng)活性的 1/10。 一．轉(zhuǎn)錄系統(tǒng) 1. 體外轉(zhuǎn)錄系統(tǒng) 1）分離 RNA聚合酶，然后在體外進(jìn)行待測 DNA的轉(zhuǎn)錄反應(yīng) 2）利用全細(xì)胞抽提液，加入外源 DNA，目前使用最廣泛的抽