【正文】 元件：主要分為通用轉(zhuǎn)錄因子和轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子兩大類。2，人口合成寡聚脫氧核糖核酸經(jīng)過化學(xué)修飾導(dǎo)入細(xì)胞，與mRNA與 DNA結(jié)合，形成RNA/DNA雜鏈或DNA核苷酸三聚體，影響基因的翻譯或轉(zhuǎn)錄。引物的延伸：溫度至70 ℃左右， Taq DNA聚合酶以４種dNTP為原料，以目的DNA為模板，催化以引物３’末端為起點(diǎn)的5’→3’DNA鏈延伸反應(yīng)，形成新生DNA鏈。它是用人為的方法將所需要的某一供體生物的遺傳物質(zhì)——DNA大分子提取出來，在離體條件下用適當(dāng)?shù)墓ぞ呙高M(jìn)行切割后，把它與作為載體的DNA分子連接起來，然后與載體一起導(dǎo)入某一更易生長、繁殖的受體細(xì)胞中，以讓外源物質(zhì)在其中“安家落戶”，進(jìn)行正常的復(fù)制和表達(dá)，從而獲得新物種的一種嶄新技術(shù)。PCR全過程每一步的轉(zhuǎn)換是通過溫度的改變來控制的。2，基因治療人體試驗(yàn)，到目前為止，已有部分經(jīng)批準(zhǔn)或經(jīng)實(shí)施。15如何利用抗體標(biāo)記基因篩選陽性克隆？答：大多數(shù)質(zhì)粒載體均帶有抗生素抗性基因，常見的有抗氨芐西林基因，抗四環(huán)素基因等，當(dāng)帶有完整抗性基因的載體轉(zhuǎn)化抗性細(xì)胞后，所有轉(zhuǎn)入載體的細(xì)菌都獲得了抗性，被轉(zhuǎn)化的陽性克隆菌能在相應(yīng)抗生素的瓊脂平板上生長，并形成菌落，而未被轉(zhuǎn)化的原宿主菌則不能生長，據(jù)此可篩選攜帶外源基因的重組DNA轉(zhuǎn)化子。目前最普遍最先進(jìn)的方法，是將雙脫氧核糖核酸進(jìn)行不同熒光標(biāo)記。4 構(gòu)建cDNA文庫的意義？常用載體及構(gòu)建過程如何？答：意義：通過構(gòu)建cDNA文庫能直接分離到生命活動(dòng)過程中的一些調(diào)控基因及了解這些基因所編碼的蛋白質(zhì)的相互作用關(guān)系．因此cDNA文庫的構(gòu)建是基因克隆的重要方法之一，從cDNA文庫中可以篩選到所需的目的基因，并直接用于該目的基因的表達(dá)。53基因表達(dá)：是目的基因DNA在導(dǎo)入的細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)錄成mRNA, 再以mRNA指導(dǎo)翻譯成蛋白質(zhì)。45基因修正(gene correction)是指將致病基因的突變堿基序列得以糾正，而正常序列部分予以保留，使突變的致病基因恢復(fù)正常功能。 36錯(cuò)義突變：是指堿基序列的改變引起了產(chǎn)物氨基酸的序列改變。它是轉(zhuǎn)錄物被剪除掉的相應(yīng)DNA分子。11cDNA文庫：以mRNA為模板在反轉(zhuǎn)錄酶的作用下將形成的互補(bǔ)DNA（cDNA ）建立基因文庫（gene library）12轉(zhuǎn)染：病毒（含噬菌體）DNA及其重組子DNA導(dǎo)入宿主細(xì)胞（或細(xì)菌）的過程稱轉(zhuǎn)染。1移動(dòng)基因：又叫轉(zhuǎn)位因子（transposable elements）,由于它可以在染色體基因組上移動(dòng)，甚至可在不同染色體間躍遷，故又稱跳躍基因（jumping gene）。13轉(zhuǎn)導(dǎo)：以噬菌體為媒介，將外源DNA導(dǎo)入細(xì)菌的過程稱轉(zhuǎn)導(dǎo)。24Exon：即表達(dá)子（編碼序列），與原核的蛋白質(zhì)編碼基因相比，真核蛋白質(zhì)編碼基因最主要的特點(diǎn)是其轉(zhuǎn)錄區(qū)的編碼序列是間斷的不聯(lián)系的，其中編碼氨基酸的序列叫表達(dá)子。有些錯(cuò)義突變嚴(yán)重影響到蛋白質(zhì)活性甚至完全失去活性，從而影響了表型。即使致病基因的突變序列糾正為正常序列（用堿基點(diǎn)突變技術(shù)）。54RTPCR：即逆轉(zhuǎn)錄PCR，先在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下以mRNA為模板合成DNA,再以cDNA為模板進(jìn)行PCR反應(yīng)。它是發(fā)現(xiàn)新基因和研究基因功能的工具。將PCR反應(yīng)獲得的總DNA通過毛細(xì)管電泳分離，跑到最末端的DNA就可以在激光的作用下發(fā)出熒光。在含有兩個(gè)抗性基因的載體中，如果目的基因DNA片段插入其中一個(gè)抗性基因，就會(huì)導(dǎo)致該抗性基因的功能失活，用兩個(gè)分別含不同抗生素藥物的平板進(jìn)行對(duì)照篩選，可篩選出陽性重組子克隆菌體。3，有部分人體基因治療計(jì)劃將開始進(jìn)行。需要重復(fù)進(jìn)行DNA模板解鏈、引物與模板DNA結(jié)合、DNA聚合酶催化新生DNA的合成，即高溫變性、低溫退火、中溫延伸３個(gè)步驟構(gòu)成PCR反應(yīng)的一個(gè)循環(huán)，此循環(huán)的反復(fù)進(jìn)行，就可使目的DNA得以迅速擴(kuò)增。基本操作步驟：1提取目的基因2目的基因與運(yùn)載體結(jié)合3將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞4目的基因的檢測和表達(dá)8 / 8。退火：引物＋單鏈DNA 雜交鏈，引物的Tm值。答：1，將特異的反義基因重組到表達(dá)載體上，導(dǎo)入靶細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄出反義RNA，形成雙鏈RNA,阻礙基因的翻譯。作用特點(diǎn)：是能夠與DNA結(jié)合蛋白質(zhì)結(jié)合的特定序列的DNA片段，決定轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)和RNA聚合酶的轉(zhuǎn)錄效應(yīng)。8試?yán)L圖并說明大引物PCR定點(diǎn)誘變法的過程。過程： 1)取材：mRNA約占總RNA的1－5％，所以應(yīng)選用目的基因mRNA表達(dá)最豐富的組織細(xì)胞為材料來源，如獲胰島素基因，由應(yīng)以胰島β細(xì)胞為原始生物材料，細(xì)胞因子基因應(yīng)選用經(jīng)抗原或絲裂原刺激培養(yǎng)的淋巴細(xì)胞為材料；2)從總的RNA中分離mRNA：將提取的mRNA在寡聚脫氧胸苷酸[ oligo(dT) ] 纖維素中進(jìn)行親和層析 cDNA合成 1）以O(shè)ligo(dT) 為引物：從模板3’末端開始，沿模板的3’→5’方向合成, 對(duì)于較長的mRNA分子很難得到全長cDNA ；2）隨機(jī)引物：以6～8個(gè)核苷酸為隨機(jī)引物，從mRNA的不同結(jié)合點(diǎn)合成全長cDNA第一鏈（RNADNA）⑴ 自身引導(dǎo)法；⑵ 置換合成法；⑶ 外加引物合成法 5構(gòu)建基因組文庫的意義及構(gòu)建過程如何？答：意義：提供全套遺傳信息, 即完整的基因組DNA,可以研究基因組中5’端控制基因轉(zhuǎn)錄的調(diào)控序列, 內(nèi)含子的分布和作用, 以及重復(fù)序列的數(shù)量分布及大小過程：⑴ 分離純化基因組DNA,提取哺乳動(dòng)物細(xì)胞染色體DNA； ⑵制備全部基因組的DNA片斷。是一種快速、簡便且敏感性極高的檢測RNA的方法，可用于分析基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物、克隆cDNA及合成cDNA探針、改造cDNA序列等。 47基因失活(gene inactivation)就是應(yīng)用反義技術(shù)(antisense technology)特異封閉某些基因的表達(dá)，以達(dá)到抑制或阻止某些有害基因的表達(dá)。 ：某個(gè)堿基的改變可使某種氨基酸的密碼子突變?yōu)榻K止密碼子。25轉(zhuǎn)錄（transcription）:遺生物體以DNA為合成RNA的過程稱為轉(zhuǎn)錄。使原來細(xì)胞的遺傳基因和遺