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醫(yī)學(xué)實驗常用方法學(xué)簡介(留存版)

2025-07-10 04:21上一頁面

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【正文】 粘多糖 常用酶 蛋白酶類 胰酶:脂鍵、肽鍵 膠原酶:膠原 溶菌酶:糖蛋白和肽的糖苷鍵 血管 彈性蛋白酶:糖蛋白和彈性蛋白 心臟 肝臟 注意: 溶解液 酶效價 時間 新鮮組織、酶解時間過長,細胞自溶 pH值 堿性:胃蛋白酶失活 中性:胰酶活性欠佳 酶純度 細胞膜改變 機械法 剪碎組織 100目尼龍網(wǎng)過濾(去除大組織塊) 離心 1000prm35分鐘,去上清 洗三次,每次離心( 500~800prm)取上清, 棄細胞碎片 300目尼龍網(wǎng)過濾去除細胞團塊 。 ( A)自發(fā)熒光 ( B)二次熒光 ( C)抗體熒光技術(shù) ( A)自發(fā)熒光 (不加染色) 有些物質(zhì)不加染色,也能發(fā)出熒光(自發(fā)熒光或原發(fā)熒光),但在醫(yī)學(xué)和生物學(xué)(細胞學(xué)、生物組織、培養(yǎng)體等)領(lǐng)域中,只有很少物質(zhì)具有自發(fā)熒光,常采用后兩種方法。 相差顯微鏡 ( phase contrast microscope) 用于進行細胞培養(yǎng)中活細胞的觀察,可使無色透明的細胞鏡下結(jié)構(gòu)反差明顯,圖像清晰。 透射電鏡( transmission electron microscope) 用于觀察組織或細胞表面的微細結(jié)構(gòu),標(biāo)本需經(jīng)噴鍍金屬膜特殊處理,然后在掃描電鏡下觀察,在熒光屏上掃描成像,呈現(xiàn)富于立體感的表面圖像,如細胞表面的微絨毛、纖毛和細胞伸出的偽足等。 核酸 顯示 DNA的傳統(tǒng)方法是 Feulgen反應(yīng)( Feulgen reaction),組織切片或細胞涂片先經(jīng)稀鹽酸處理,使 DNA水解,醛基暴露,再用雪夫試劑處理,形成紫紅色反應(yīng)產(chǎn)物。該技術(shù)的建立為細胞動力學(xué)、免疫學(xué)、血液學(xué)和腫瘤學(xué)等的研究提供了重要的研究手段。 ( B)二次熒光 (用化學(xué)染色) 非熒光性的物質(zhì)(蛋白質(zhì)、炭水化合物等)用熒光色素染色,由熒光色素產(chǎn)生熒光(二次熒光),以便進行觀察,對特定物體選擇合適的熒光色素,該物體就能和周圍的組織或
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