醫(yī)學(xué)實驗常用方法學(xué)簡介-預(yù)覽頁
【正文】 和蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì)的分布。 脂類 標本用甲醛固定，冷凍切片，用油紅 O、尼羅藍或蘇丹類染料染色，使組織和細胞中的脂類物質(zhì)顯示相應(yīng)顏色。 （三）組織化學(xué)術(shù)（ histochemistry） 應(yīng)用化學(xué)反應(yīng)與物理反應(yīng)原理檢測組織或細胞內(nèi)某種化學(xué)成分并進行定位、定量及相關(guān)功能研究的技術(shù)。 相差顯微鏡 （ phase contrast microscope） 用于進行細胞培養(yǎng)中活細胞的觀察，可使無色透明的細胞鏡下結(jié)構(gòu)反差明顯，圖像清晰。 掃描電鏡（ scanning electron microscope) 冰凍切片 組織置入液氮（ 196℃ ）快速凍結(jié)，恒冷切 片機切片、染色。在電鏡下所見的結(jié)構(gòu)稱為超微結(jié)構(gòu) (ultrastructure)。光鏡分辨率為，放大倍數(shù)約為 1000倍，而電鏡的分辨率為，比光鏡高 1000倍，可放大幾萬倍至幾十萬倍，因此電鏡能觀察到更微細的結(jié)構(gòu)。 透射電鏡（ transmission electron microscope） 用于觀察組織或細胞表面的微細結(jié)構(gòu)，標本需經(jīng)噴鍍金屬膜特殊處理，然后在掃描電鏡下觀察，在熒光屏上掃描成像，呈現(xiàn)富于立體感的表面圖像，如細胞表面的微絨毛、纖毛和細胞伸出的偽足等。光源為高壓汞燈，可產(chǎn)生紫外光，標本中的自發(fā)熒光物質(zhì)或經(jīng)熒光素染色或標記的結(jié)構(gòu)在紫外光激發(fā)下可產(chǎn)生各種顏色的熒光，以此來研究該熒光物質(zhì)在細胞和組織中的分布?？捎脕硌芯炕罴毎麅?nèi) Ca Na+和 K+等 pH值的動態(tài)變化；細胞內(nèi)各種細胞器、細胞骨架、核酸、蛋白質(zhì)和受體等的定位和定量分析；細胞膜電位、膜通道及信息傳遞的檢測；利用激光對細胞結(jié)構(gòu)或染色體作切割、分離和克隆等逐漸成為生物醫(yī)學(xué)研究中重要的研究手段。此反應(yīng)稱 PAS陽性反應(yīng)，PAS陽性部位為多糖存在部位。 核酸 顯示 DNA的傳統(tǒng)方法是 Feulgen反應(yīng)（ Feulgen reaction），組織切片或細胞涂片先經(jīng)稀鹽酸處理，使 DNA水解，醛基暴露，再用雪夫試劑處理，形成紫紅色反應(yīng)產(chǎn)物。 熒光的觀察 （按標本分類） 在熒光顯微鏡下觀察的標本，當(dāng)然必須發(fā)出熒光，可是大多數(shù)標本本身不能發(fā)出熒光，因而必須用熒光色素處理過才能發(fā)出熒光。 （ B）二次熒光 （用化學(xué)染色） 非熒光性的物質(zhì)（蛋白質(zhì)、炭水化合物等）用熒光色素染色，由熒光色素產(chǎn)生熒光（二次熒光），以便進行觀察，對特定物體選擇合適的熒光色素，該物體就能和周圍的組織或細胞區(qū)別（分離）出來而可以觀察到。應(yīng)用某種已知的并被標記的 RNA或 DNA片段即核酸探針（ cRNA或 cDNA），與細胞內(nèi)的待測核酸（ RNA或 DNA片段）進行雜交，通過標記物的顯示在光鏡和（或）電鏡下觀察目的 mRNA或 DNA的存在與定位。該技術(shù)的建立為細胞動力學(xué)、免疫學(xué)、血液學(xué)和腫瘤學(xué)等的研究提供了重要的研究手段
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