【正文】 毒活疫苗 ， 凍干疫苗為乳白色疏松體 ，溶解后應(yīng)為乳白色澄明液體 ， 無異物 。 ?主要包括以下三個方面：人員、廠房和設(shè)備和原材料（硬件）、管理制度和要求（軟件） ? 生物制品規(guī)程 ?《 中國生物制品規(guī)程 》 是我國生物制品生產(chǎn)、檢定、經(jīng)營和使用的技術(shù)法規(guī)，是監(jiān)督檢 驗生物制品質(zhì)量的法定標準。疫苗穩(wěn)定性提高 1倍以上。起病徐緩，部分患者可轉(zhuǎn)為慢性，少數(shù)還可導(dǎo)致肝硬化和肝癌。 ? 1991年 Willams等發(fā)現(xiàn)外源基因輸入體內(nèi)的表達產(chǎn)物可誘導(dǎo)產(chǎn)生免疫應(yīng)答。 曾研究過用真核和原核細胞作為表達宿主，包括哺乳動物細胞、植物細胞、酵母、細菌和病毒等。 1963年 Blumberg首先在澳大利亞土著人血清中發(fā)現(xiàn)一種新抗原，稱為澳大利亞抗原（ Australia antigen）；直至 1968年確定這種抗原與血清型肝炎密切相關(guān)，稱為肝炎相關(guān)抗原（ hepatitis associated antigen， HAA）； 1970年 . Dane在肝炎患者血清中發(fā)現(xiàn)具有傳染性的顆粒，即 Dane顆粒（ Dane39。 ? 疫苗的滅活 ?原則：充分破壞疫苗的毒力，盡量減少疫苗免疫力損失。腫瘤疫苗也是研究的熱點之一。 上臂外側(cè)三角肌附著處 ， 用75%酒精皮膚消毒后 ， 皮下一次注射 。 （ 2） 月齡小的兒童 ， 喂服糖丸疫苗時可將糖丸碾碎 ， 放入藥匙內(nèi) ， 加少許涼開水溶解成糊狀服用 。 亞單位疫苗 ?優(yōu)點 ? 采用純化蛋白保證疫苗安全性和穩(wěn)定性 ?缺點 ? 純化成本高 ? 分離的蛋白不具有與病原體相同的構(gòu)象，因此可能沒有相應(yīng)的抗原性 ?單純皰疹病毒（ HSV） ? 性傳播疾病 ? 潛在致癌性 ? 腦炎和嚴重的眼部感染 ?亞單位疫苗可能是最有效的 ? 減活或失活率必須是 100％，否則，人群有感染危險 亞單位疫苗（ example） 減活疫苗（ Attenuated） ?減活疫苗 ?通常更有效（較前兩種疫苗） ?但不能含有任何毒力 我國乙肝疫苗現(xiàn)狀及存在的問題 乙肝疫苗 第一代乙肝疫苗， 屬血源疫苗，由無癥狀乙型肝炎表面抗原陽性者的血漿制備而得。 ? 凡是用病毒免疫馬或其他大動物，所取得的免疫血清，稱為抗病毒血清。 ?4 我國流行的 H及 A基因組病毒 ,H1H2為大多數(shù)。 ?如甲肝滅活疫苗、乙腦滅活疫苗、脊髓灰質(zhì)炎滅活疫苗等。 優(yōu)點：不含活的病原體和病毒核酸，安全有效，成本低廉。 ?被動免疫：抗體 IgG接種人體后，抗體停留體內(nèi)，當日有效。 ? ： 包括體內(nèi)診斷制品和體外診斷制品。 從疫苗生產(chǎn)看生物制品的發(fā)展 ? 12世紀，中國開始用人痘接種預(yù)防天花，從癥狀輕微的天花病人身上人工接染到健康兒童，使其通過產(chǎn)生輕微癥狀的感染獲得免疫力，避免天花引起的嚴重疾病甚至死亡。 ? 經(jīng)過一百多年的努力， 1980年 世界衛(wèi)生組織宣布全球 消滅了 天花 。 ?B:外界環(huán)境因素對微生物的影響 一方面可創(chuàng)造有利條件，促進它們的生長繁殖，以制備生物制品；另一方面也可利用對微生物不利的因素使其發(fā)生變異或殺滅之，以更好地為制造生物制品服務(wù)。如霍亂、百日咳、傷寒、鉤端螺旋體疫苗。常用的植物有蕃茄、馬鈴薯、香蕉等。常規(guī)免疫 3針間隔 68周。 ?預(yù)防用生物制品按所用材料一般分 細菌性疫苗、病毒性疫苗及類毒素 三大類。 ?可用作抗原的生物活性物質(zhì) 有： 滅活病毒或細菌、活病毒 或細菌通過實驗室多次傳代得到的 減毒株、病毒或菌體提純物、有效蛋白成分、類毒素、細菌多糖、合成多肽 以及近年來發(fā)展 DNA疫苗所用的 核酸 等。 新生嬰兒，特別是母親為乙型肝炎表面抗原陽性的新生嬰兒，產(chǎn)后應(yīng)立即給嬰兒接種乙肝疫苗，學齡前和學齡兒童亦應(yīng)接種。 ?用法與劑量：按瓶簽示量加滅菌注射用水 ， 待完全溶解搖勻后使用 。 ?規(guī)格： 。 生物制品的標準化 生物制品的標準化 ? 生物制品標準物質(zhì) ?定義 ：系指用于生物制品效價、活性或含量測定的或其特性鑒別、檢查的生物標準品或生物參考物質(zhì)。 細菌類疫苗和類毒素的一般制造方法 ?細菌類疫苗和類毒素均由細菌培養(yǎng)開始， 制備的主要程序相似。 乙肝病毒發(fā)病區(qū)域 乙型肝炎病毒 形態(tài)與結(jié)構(gòu) 完整的 HBV顆粒亦稱Dane顆粒，直徑為 42nm，具有雙層核殼結(jié)構(gòu)： 核心顆粒 ：直徑為 28nm。 ? 1992年 Tang等將表達人生長激素的基因質(zhì)粒 DNA導(dǎo)入小鼠皮內(nèi)，小鼠產(chǎn)生特異性抗體，從而提出了基因免疫的概念。 ?(3)用一含 HbsAg的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化中國倉鼠卵巢細胞 (CHO),在該細胞中表達 HbsAg蛋白 ,釋放于培養(yǎng)液中 ,從培養(yǎng)液中提純抗原蛋白。 ? HBV的發(fā)現(xiàn)源于表面抗原的研究。 ?（ 4）細胞培養(yǎng)。 疫苗的發(fā)展前景 ?目前，已有治療性疫苗治療麻風、慢支、皰疹病毒感染、愛滋病和乙肝等疾病的臨床試驗報告。 ?用法與劑量：加 ， 等完全溶解搖勻后使用 。 （ 1） 用消毒的藥匙將脊髓灰質(zhì)炎疫苗送入兒童口中 ， 用涼開水送服咽下 。 5 疫苗的研制策略 ?當代疫苗 ?滅活疫苗 ?殺死的病原體 ?減活疫苗 ?活的，無毒力的病原體 生產(chǎn)過程 ?組織培養(yǎng)病原體 ?純化病原體 ?失活或減活 ?并沒失去激發(fā)免疫的能力 局限性 ?不是所有的病原體都能用組織培養(yǎng) ?細胞培養(yǎng)價格昂貴 ?產(chǎn)量、生產(chǎn)率低 ?需要特殊的安全預(yù)防措施 ?失活或減活都必須 100％ ?保存期限短，需低溫保藏 ?不能預(yù)防所有的疾病 rDNA技術(shù)對疫苗研究的促進 ?減活疫苗通過清除致病基因?qū)崿F(xiàn) ?基因工程疫苗，無致病性載體攜帶致病病原體的抗原性決定簇 ?非組織培養(yǎng)，克隆基因和過量表達蛋白作為疫苗（亞單位疫苗） 多種基因工程疫苗研制策略 ?亞單位疫苗 ?肽疫苗 ?減活疫苗 ?DNA疫苗 亞單位疫苗 ?通常是整個病原體制備減活或滅活疫苗 ?免疫反應(yīng)的激發(fā)通常是通過病原體的外 殼蛋白起作用 動物病毒 ？ 是不是需要完整的病原體 亞單位疫苗 ?激發(fā)免疫反應(yīng)僅僅需要病原體外殼蛋白 ?利用病原體的某些成分而不是整個病原體是“亞基”疫苗。 ? 凡是用細菌免疫馬或其他大動物所取得的免疫血清，稱為抗菌血清。 ?３ ８０年代病毒野毒株 HN蛋白基因有漂移，其中 H蛋白和疫苗株相比有５６個核苷酸變異， N蛋白和疫苗株相比有７６個核苷酸變異。 ?滅活疫苗是將病原體培養(yǎng)繁殖后殺死病原體，再進行純化處理使之完全失去感染性，保留病原體的免疫原性。 重組抗原疫苗 (rebinant antigen vaccine) 是利用 DNA重組技術(shù)制備的只含保護性抗原的純化疫苗。主動免疫包括體液免疫（抗體）細胞免疫，如麻疹疫苗、脊髓灰質(zhì)炎疫苗、百白破疫苗等。 ? ： 如人血白蛋白、人免疫球蛋白、人凝血因子（天然或重組的）、紅細胞濃縮物等。 ? 包括各種 疫苗、抗血清、抗毒素、類毒素、免疫調(diào)節(jié)劑、診斷試劑 等。 ? 1870年 ，法國科學家 巴斯德 發(fā)明了第一個細菌減毒活疫苗 —— 雞霍亂疫苗。 ?常用的幾個概念： 消毒；滅菌；無菌；防腐。 優(yōu)點：主要誘導(dǎo)特異性抗體產(chǎn)生，安全 缺點：不能繁殖，需多次刺激，注射局部和全身反應(yīng)嚴重 2）減毒活疫苗 （ liveattenuated Vacc