【正文】 存在下能夠有效地起作用 。 有些抗體能在蛋白質(zhì)開始伸展的部位或被蛋白酶水解的部位起作用 ， 因而起到穩(wěn)定作用 。 共價修飾 酶的共價修飾方式 ① 磷酸化 /去磷酸化； ②乙酰化 /去乙?；?； ③腺苷?；?/去腺苷?；?； ④尿苷?；?/去尿苷?；? ⑤甲基化 /去甲基化； ⑥氧化 (S—S)/還原 (2SH)。 ③ 針對異體反應(yīng) ,降低生物識別能力 ,降低免疫原性 . ?Low solubility ?Poor stability ?Oral delivery of proteins impossible because they are destroyed by the digestive system ?Injected proteins are quickly removed by renal excretion 酶應(yīng)用研究上的目的 2. 酶分子的修飾方法 . 酶輔因子的置換修飾 . 大分子結(jié)合修飾 . 小分子修飾 . 分子內(nèi)交聯(lián) . 分子間交聯(lián) . 氨基酸的置換修飾 . 肽鏈的有限水解 . 物理修飾 通過改變酶分子中的輔因子，使酶的特性和功能發(fā)生改變，主要是金屬離子的置換，因此該方法又稱為離子置換法。 所以 ， 用抗體穩(wěn)定酶的方法較普遍 。 ? Overlap extension method requires 2 mutagenic primers and 2 others。 例如用戊二醛將胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶交聯(lián)在一起 。 C 95176。 (6)研究酶的固定化技術(shù)。 (3)測定酶蛋白部分區(qū)域的構(gòu)象狀態(tài)。 C 65176。 結(jié)果發(fā)現(xiàn) ， 用 1,4—二氨基丁烷交聯(lián)該酶 ， 可得到穩(wěn)定性有所改善的酶制劑 酶分子內(nèi)部兩個側(cè)鏈基團反應(yīng)， 增加酶分子表面交聯(lián)鍵的數(shù)目是穩(wěn)定酶的方法之一。 fragment that overlap and each have the mutation。 ?在醫(yī)學(xué)上要解決酶 —抗體復(fù)合物在體內(nèi)的抗原性。 酶的多聚體或酶聚合體的活力和穩(wěn)定性比單體高就是這個原因 。酶的分子修飾 Enzyme modification 通過主鏈的 “ 切割 ” 、 “ 剪接 ” 和側(cè)鏈基團的 “ 化學(xué)修飾 ” ,以改變其結(jié)構(gòu)、性質(zhì)及生物活性等 .這種應(yīng)用化學(xué)方法對酶分子施行種種 “ 手術(shù) ” 的技術(shù) 或在體外將酶分子通過人工的方法與一些化學(xué)基團 (物質(zhì) )，特別是具有生物相容性的 物質(zhì) ， 進行共價連接 ， 從而改變酶的結(jié)構(gòu)和性質(zhì) 。 有些來自嗜熱菌的酶具有較高穩(wěn)定性 ， 其原因正是由于保護性大分子 (如肽和聚胺 )發(fā)揮作用的結(jié)果 。最近報告表明，已經(jīng)成功地由大腸桿菌生產(chǎn)具有完整功能的重組抗體片段，而且用同一種微生物既能生產(chǎn)目的蛋白又生產(chǎn)其抗體的可能性。 fragment and a 3180。 ?Clain 和 Navia首次證實了利用交聯(lián)酶晶體 (Crosslinked enzyme crystal,CLEC)技術(shù)提高了嗜熱菌蛋白酶的生物活性 ,增加了其熱穩(wěn)定性。 C EXTENSION 72176。 (4)探索酶的作用機理和催化反應(yīng)歷程。 (5)探索酶分子的拓撲學(xué)及寡聚酶的亞基結(jié)合狀態(tài)。 C 2535 CYCLES DENATURATION 93176。 ?枯草桿菌蛋白酶經(jīng)預(yù)處理 ,凍干形成交聯(lián)酶晶體 ,在有機溶劑和水溶液中的穩(wěn)定性大大增加 ,活力可提高 13倍 ?利用葡聚糖二乙醛將青霉素Ｇ?；高M行交聯(lián) ,使其在55℃ 下的半衰期提高 9倍 ,而Ｖｍａｘ保持不變 用雙功能或多功能試劑使不同的酶交聯(lián)起來產(chǎn)生雜化酶 。 ? Amplify a 5180。 缺點： ?制備抗體花費較多，解決的辦法是用微生物來生產(chǎn)。 主要是二價離子的置換修飾 置換修飾過程 酶液中加入 EDTA 透析或超濾 加入金屬離子 置換修飾酶 等價同荷置換 置換修飾的要點 舉例 ?蛋白酶（ Zn2＋ ） 蛋白酶（ Ca2＋ ），活力提高 ? α 淀粉酶 （雜離子型） Ca2＋ 型，活力增加，穩(wěn)定性增加 ?大分子的非共價修飾 ?大分子的共價修飾 ?大分子的非共價修飾 ?非蛋白質(zhì)修飾物 多元醇、多糖、多聚氨基酸、多胺 如聚乙二醇、右旋糖苷等 能與酶非共價地相互作用而有效地保護