【正文】 值 ? Sephadex G25 除鹽：柱長(zhǎng) 50cm；上樣小于床體積的 20% ? 3） 濃縮： a） 火棉膠 b） 聚乙二醇 （ PEG） ? c） 超濾 （ 35kg/cm2） d） 凍干 透析技術(shù)原理圖 超濾技術(shù)原理圖 第三節(jié) 酶的精制 一、層析技術(shù)（ chromatography） 1） 分配層析 ：物質(zhì)在兩相中的分配系數(shù)不同 a） 紙層 b） 薄層 (比紙層靈敏 100倍但剝板困難 ) c） 柱層 2） 吸附層析 （ absorption chromatography） ：吸附劑對(duì)通過(guò)它的物質(zhì)吸附力不同 ， 吸附力包括離子引力 、 疏水作用 、 范德華力和氫鍵 a） 薄層 b） 柱層 ? 填料一般為硅膠 、 氧化鋁 、 磷酸鈣 、 活性白土和羥基磷灰石；常用羥基磷灰石 。從肝細(xì)胞中提取的一種蛋白水解酶的粗提液 300mL含有 150mg蛋白質(zhì) ， 總活力為 360單位 。 ? 酶活力：檢測(cè)目的酶的活力 ? 目的蛋白 （ 非酶 ） 檢測(cè)較困難 第一次比活力每次比活力 純化倍數(shù) = 回收率 % = 100 第一次總活力每次總活力 酶的提純過(guò)程記錄格式 步驟 總體積（ ml） 蛋白總量（ mg） 總活力（ u） 比活力（ u/mg） 回收率 （ %） 提純 倍數(shù) 粗抽提液 50℃ 熱變性除雜 硫銨分級(jí)沉淀（30%50%） DEAE纖維素 離子交換 凝膠過(guò)濾SephadexG100 1000 1000 250 25 10 12022 8000 750 35 5000 48000 2730 1820 1700 52 185 100 96 55 34 125 444 第五節(jié) 酶