蛋白質(zhì)含量測定方法比較(專業(yè)版)
【正文】 適合于各種食品中蛋白質(zhì)的測定以及各類動(dòng)植物蛋白測定?？捡R斯亮藍(lán)法考馬斯亮蘭G250染料，在酸性溶液中與蛋白質(zhì)結(jié)合，使染料的最大吸收峰的位置（lmax），由465nm變?yōu)?95nm，溶液的顏色也由棕黑色變?yōu)樘m色。但是因?yàn)椴煌牡鞍踪|(zhì)和核酸的紫外吸收是不相同的，雖然經(jīng)過校正，測定的結(jié)果還是存在一定的誤差。缺點(diǎn)：不太靈敏；不同蛋白質(zhì)顯色相似。這五種方法各有特點(diǎn)，優(yōu)缺點(diǎn)明確。優(yōu)點(diǎn)：較快速 ，不同的蛋白質(zhì)產(chǎn)生顏色的深淺相近，以及干擾物質(zhì)少。故該法適于用測定與標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)氨基酸組成相似的蛋白質(zhì)。含硫酸銨的溶液，只須加濃碳酸鈉—?dú)溲趸c溶液，即可顯色測定。（。紫外吸收定氮法適用于柱層析洗脫液的快速連續(xù)檢測，因?yàn)榇藭r(shí)只需測定蛋白質(zhì)濃度的變化，而不需知道其絕對值。優(yōu)點(diǎn)：靈敏度高，據(jù)估計(jì)比Lowry法約高四倍，其最低蛋白質(zhì)檢測量可達(dá)1mg。這兩種顯色反應(yīng)產(chǎn)生深藍(lán)色的原因是：?在堿性條件下，蛋白質(zhì)中的肽鍵與銅結(jié)合生成復(fù)合物。形成顏色產(chǎn)物的量取決于蛋白質(zhì)的濃度。因?yàn)槭称分谐鞍踪|(zhì)外，還含有其它含氮物質(zhì)，所以此蛋白質(zhì)稱為粗蛋白。紫色絡(luò)合物顏色的深淺與蛋白質(zhì)濃度成正比，而與蛋白質(zhì)分子量及氨基酸成分無關(guān)，故可用來測定蛋白質(zhì)含量。呈色穩(wěn)定性好,試劑單一,方法簡便。而且對后者的影響還要大得多。如干擾Lowry法的K+、Na+、Mg2+離子、Tris緩沖液、糖和蔗糖、甘油、巰基乙醇、EDTA等均不干擾此測定法。通常測定范圍是20~250m
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