蛋白質(zhì)含量測定方法比較-文庫吧
2025-11-05 03:36 本頁面
【正文】 需要快速，但并不需要十分精確的蛋白質(zhì)測定。缺點：不太靈敏；不同蛋白質(zhì)顯色相似。紫外吸收定氮法雙縮脲法是傳統(tǒng)的分光光度法測定蛋白質(zhì)的方法,當含有兩個或者兩個以上肽鍵的物質(zhì)和堿性的硫酸銅反應時,形成紫色的絡合物,這個顏色產(chǎn)物是肽鍵中的氮原子和銅離子配價結(jié)合的結(jié)果。蛋白質(zhì)分子中，酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸殘基的苯環(huán)含有共軛雙鍵，使蛋白質(zhì)具有吸收紫外光的性質(zhì)。形成顏色產(chǎn)物的量取決于蛋白質(zhì)的濃度。實際測定時,必須預先用標準蛋白質(zhì)溶液制作一個標準校正曲線,通常用牛血清白蛋白水溶液做蛋白質(zhì)標準溶液。不同濃度的標準蛋白質(zhì)溶液加入雙縮脲試劑后,反應生成的顏色產(chǎn)物用紫外可見分光光度計在540nm 波長下測定吸光度,以雙縮脲試劑加緩沖或水作空白對照。然后將測得的值分別對蛋白濃度(mg/ ml) 作圖,得標準曲線。未知蛋白樣品用雙縮脲試劑做同樣處理,根據(jù)測得吸光度值在標準曲線上直接查得未知蛋白質(zhì)樣品中得蛋白質(zhì)濃度。優(yōu)點：對各種蛋白質(zhì)呈色基本相同。特異性和準確度好,精密度好。呈色穩(wěn)定性好,試劑單一,方法簡便?？焖?，不消耗樣品，測定后仍能回收使用。缺點：準確度較差，干擾物質(zhì)多，在用標準曲線法測定蛋白質(zhì)含量時，對那些與標準蛋白質(zhì)中酪氨酸和色氨酸含量差異大的蛋白質(zhì)，有一定的誤差。故該法適于用測定與標準蛋白質(zhì)氨基酸組成相似的蛋白質(zhì)。若樣品中含有嘌呤、嘧啶及核酸等吸收紫外光的物質(zhì)，會出現(xiàn)較大的干擾。核酸的干擾可以通過查校正表，再進行計算的方法，加以適
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