蛋白質(zhì)含量測(cè)定方法比較-文庫(kù)吧
2024-11-19 03:36 本頁面
【正文】 需要快速，但并不需要十分精確的蛋白質(zhì)測(cè)定。缺點(diǎn)：不太靈敏；不同蛋白質(zhì)顯色相似。紫外吸收定氮法雙縮脲法是傳統(tǒng)的分光光度法測(cè)定蛋白質(zhì)的方法,當(dāng)含有兩個(gè)或者兩個(gè)以上肽鍵的物質(zhì)和堿性的硫酸銅反應(yīng)時(shí),形成紫色的絡(luò)合物,這個(gè)顏色產(chǎn)物是肽鍵中的氮原子和銅離子配價(jià)結(jié)合的結(jié)果。蛋白質(zhì)分子中，酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸殘基的苯環(huán)含有共軛雙鍵，使蛋白質(zhì)具有吸收紫外光的性質(zhì)。形成顏色產(chǎn)物的量取決于蛋白質(zhì)的濃度。實(shí)際測(cè)定時(shí),必須預(yù)先用標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液制作一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)校正曲線,通常用牛血清白蛋白水溶液做蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液。不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液加入雙縮脲試劑后,反應(yīng)生成的顏色產(chǎn)物用紫外可見分光光度計(jì)在540nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度,以雙縮脲試劑加緩沖或水作空白對(duì)照。然后將測(cè)得的值分別對(duì)蛋白濃度(mg/ ml) 作圖,得標(biāo)準(zhǔn)曲線。未知蛋白樣品用雙縮脲試劑做同樣處理,根據(jù)測(cè)得吸光度值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上直接查得未知蛋白質(zhì)樣品中得蛋白質(zhì)濃度。優(yōu)點(diǎn)：對(duì)各種蛋白質(zhì)呈色基本相同。特異性和準(zhǔn)確度好,精密度好。呈色穩(wěn)定性好,試劑單一,方法簡(jiǎn)便?？焖?，不消耗樣品，測(cè)定后仍能回收使用。缺點(diǎn)：準(zhǔn)確度較差，干擾物質(zhì)多，在用標(biāo)準(zhǔn)曲線法測(cè)定蛋白質(zhì)含量時(shí)，對(duì)那些與標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)中酪氨酸和色氨酸含量差異大的蛋白質(zhì)，有一定的誤差。故該法適于用測(cè)定與標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)氨基酸組成相似的蛋白質(zhì)。若樣品中含有嘌呤、嘧啶及核酸等吸收紫外光的物質(zhì)，會(huì)出現(xiàn)較大的干擾。核酸的干擾可以通過查校正表，再進(jìn)行計(jì)算的方法，加以適
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