蛋白質(zhì)含量測(cè)定方法比較-全文預(yù)覽
【正文】 收定氮法雙縮脲法是傳統(tǒng)的分光光度法測(cè)定蛋白質(zhì)的方法,當(dāng)含有兩個(gè)或者兩個(gè)以上肽鍵的物質(zhì)和堿性的硫酸銅反應(yīng)時(shí),形成紫色的絡(luò)合物,這個(gè)顏色產(chǎn)物是肽鍵中的氮原子和銅離子配價(jià)結(jié)合的結(jié)果。優(yōu)點(diǎn)：較快速 ，不同的蛋白質(zhì)產(chǎn)生顏色的深淺相近，以及干擾物質(zhì)少。凡具有兩個(gè)酰胺基或兩個(gè)直接連接的肽鍵，或能過一個(gè)中間碳原子相連的肽鍵，這類化合物都有雙縮脲反應(yīng)。缺點(diǎn)：操作比較繁復(fù)，費(fèi)時(shí),試劑消耗量大。凱氏定氮法 蛋白質(zhì)是含氮的化合物。這五種方法各有特點(diǎn)，優(yōu)缺點(diǎn)明確。優(yōu)點(diǎn)：重現(xiàn)性好，是目前分析有機(jī)化合物含氮量常用的方法,是一種蛋白質(zhì)測(cè)定的經(jīng)典方法, ,測(cè)試結(jié)果準(zhǔn)確。在強(qiáng)堿性溶液中，雙縮脲與CuSO4形成紫色絡(luò)合物，稱為雙縮脲反應(yīng)。干擾這一測(cè)定的物質(zhì)主要有：硫酸銨、Tris緩沖液和某些氨基酸等。缺點(diǎn)：不太靈敏；不同蛋白質(zhì)顯色相似。實(shí)際測(cè)定時(shí),必須預(yù)先用標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液制作一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)校正曲線,通常用牛血清白蛋白水溶液做蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液。優(yōu)點(diǎn)：對(duì)各種蛋白質(zhì)呈色基本相同。缺點(diǎn)：準(zhǔn)確度較差，干擾物質(zhì)多，在用標(biāo)準(zhǔn)曲線法測(cè)定蛋白質(zhì)含量時(shí)，對(duì)那些與標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)中酪氨酸和色氨酸含量差異大的蛋白質(zhì)，有一定的誤差。但是因?yàn)椴煌牡鞍踪|(zhì)和核酸的紫外吸收是不相同的，雖然經(jīng)過校正，測(cè)定的結(jié)果還是存在一定的誤差。?Folin—酚試劑中的磷鉬酸鹽—磷鎢酸鹽被蛋白質(zhì)中的酪氨酸和苯丙氨酸殘基還原，產(chǎn)生深藍(lán)色（鉬蘭和鎢蘭的混合物）。缺點(diǎn)：費(fèi)時(shí)間較長(zhǎng)，要精確控制操作時(shí)間，標(biāo)準(zhǔn)
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