【正文】 (3)pBR322分子中另有單個的 BamH I限制酶作用位點 ， 現(xiàn)將經(jīng) BamHI處理后的質(zhì)粒與用另一種限制酶 BglⅡ 處理得到的目的基因 ， 通過 DNA連接酶作用恢復(fù) ________________鍵 ， 成功獲得了重組質(zhì)粒 ， 說明 ______________________________ (4)為了檢測上述重組質(zhì)粒是否導(dǎo)入原本無 ampR和 tetR的大腸桿菌 ， 將大腸桿菌在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上培養(yǎng) ， 得到如圖二的菌落 。 質(zhì)粒是基因工程最常用的載體 ， 它的主要特點是 ( ) ① 能自主復(fù)制 ② 不能自主復(fù)制 ③ 結(jié)構(gòu)很小 ④ 是蛋白質(zhì) ⑤ 是環(huán)狀 RNA ⑥ 是環(huán)狀 DNA ⑦ 能 “ 友好 ” 地 “ 借居 ” A． ①③⑤⑦ B． ②④⑥ C． ①③⑥⑦ D． ②③⑥⑦ [解析 ] 質(zhì)粒存在于細(xì)菌和酵母菌等生物中 ， 是一種很小的環(huán)狀 DNA， 上面有標(biāo)記基因 ， 便于在受體細(xì)胞中檢測 。 (2) _______ _ 和 ______ __ 是由另一種限制酶切割形成的____________ 末端，兩者要形成重組 DNA 片段，所用 D NA 連接酶通常是 ____________ 。其中最常用的是質(zhì)粒。 (重 、 難點 ) 3． 簡述基因工程中載體需要具備的條件 。 教材首先講述了基因工程的概念、基本工具，在此基礎(chǔ)上又講述了基因工程的基本操作程序，讓我們對基因工程有了一個較完整的認(rèn)識。 大多數(shù)限制酶的識別序列由 ⑩ ________個核苷酸組成 。 二 、 基因工程的工具 1． 限制性核酸內(nèi)切酶 (1)來源：這類酶主要是從原核生物中分離純化出來的 。 如果該線性 DNA分子在 3個酶切位點上都被該酶切斷 ， 則會產(chǎn)生 a、 b、 c、 d四種不同長度的 DNA片段 。 質(zhì)粒是小型環(huán)狀雙鏈 DNA分子而不是細(xì)胞器 ， 也不會有堿基 U。 (4)由題意知：由于與圖三空圈相對應(yīng)的大腸桿菌能在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上生長 ， 而不能在含四環(huán)素的培養(yǎng)基上生長 ， 故可推知與圖三空圈相對應(yīng)的圖二中的菌落能抗氨芐青霉素 ， 但不能抗四環(huán)素 。 而限制酶不會切斷自身 DNA， 是因為在原核生物細(xì)胞中 ， 其 DNA分子或者不具備這種限制酶的識別序列 ， 或者通過甲基化酶將甲基轉(zhuǎn)移到所識別序列的堿基上 ， 使限制酶不能將其切開 。 ③ 帶有標(biāo)記基因 ， 便于篩選 。 ② 大多數(shù)限制酶的識別序列為 6個核苷酸組成 ， 例如EcoRI、 SmaI限制酶識別序列由 6個核苷酸組成 ， 也有少數(shù)限制酶的識別序列由 5或 8個核苷酸組成 。coliDNA連接酶 T4噬菌體 磷酸二酯 區(qū)別： E在這些知識中，往往考查用遺傳學(xué)的基本知識分析生物技術(shù)的原理的能力，并考查對一些社會焦點和熱點問題理解和分析能力，認(rèn)識科學(xué)技術(shù)的發(fā)展所帶來的雙重影響。 在本專題內(nèi)容中， DNA 重組技術(shù)的基本工具、基因工程的基本操作程序是近年高考中經(jīng)常涉及的重點內(nèi)容，也是難點。 E 知識貼士： ① 若限制酶切割后形成的是黏性末端 ， 則形成的兩個黏性末端是反向重復(fù)序列 。 ② 能夠自我復(fù)制或整合到染色體 DNA上后隨染色體 DNA復(fù)制 。 限制酶在細(xì)菌內(nèi)會將外源 DNA切割掉 ， 以保證自身的安全 。 由圖二 、 圖三結(jié)果顯示 ， 多數(shù)大腸桿菌都能抗氨芐青霉素 ， 而經(jīng)限制酶 BamH I作用后 ， 標(biāo)記基因 tetR被破壞 ， 而不能抗四環(huán)素 ， 故多數(shù)大腸桿菌導(dǎo)入的是 pBR322質(zhì)粒 。 思 維 升 華 1． 與遺傳有關(guān)的各種酶的比較 名稱 作用 參與的生理 過程與應(yīng)用 作用位點 (如下圖 ) DNA 連接酶