【正文】 天藍(lán)色鏈霉菌與大腸桿菌致育類型的區(qū)別： 3 ） 大腸桿菌： F+ F育后代為 F+， Hfr F后代 F ， ? 天藍(lán)色鏈霉菌： IF UF后代 IF ， NF UF后代 NF，說明 NF染色體轉(zhuǎn)移包括致育因子 SCPI ? 在 NF UF中，以 SCPI整合位點為中心，帶動染色體高頻雙向轉(zhuǎn)移，每次轉(zhuǎn)移都包括 SCPI區(qū)域基因， ? 或者是環(huán)形染色體在 SCPI一端斷裂，從帶有 SCPI一端開始轉(zhuǎn)移。并且，每經(jīng)過一次分裂，就受到一次“稀釋”。例如：大腸桿菌溫和噬菌體 λ 只能轉(zhuǎn)導(dǎo)大腸桿菌的 gal和 bio基因 E. coliλ噬菌體 gal bio gal bio gal bio gal bio gal bio bio attp attb ? 2） Campbell 1962年提出轉(zhuǎn)導(dǎo)模型 ? 溫和噬菌體 λ 是局限性轉(zhuǎn)導(dǎo)的典型代表，該噬菌體含有一個線狀的雙鏈DNA分子，其二端為互補(bǔ)的 12個核苷酸單鏈 (即粘性末端 cos位點 )，當(dāng) λ感染細(xì)胞時通過其粘性末端形成環(huán)狀分子。 ? 這種噬菌斑是由繁殖到達(dá)一定數(shù)量后的少數(shù)溶源性細(xì)菌所自發(fā)釋放的噬菌體感染敏感細(xì)菌后形成的 。 ? 在噬菌體中最先發(fā)現(xiàn)的突變型有快速溶菌(rapidlysis， r)、寄主范圍 (host range, h)和小形噬菌斑 (minute plaque， m)等。 ? 2)在雜交過程中，按照特定時間間隔取樣，用高速攪拌器將雜交的 Hfr和 F分開，涂補(bǔ)于不同選擇性培養(yǎng)基上培養(yǎng)。 5 39。 ? 共轉(zhuǎn)化頻率可以用共轉(zhuǎn)指數(shù)代表。 A. Transformation Transfer of free DNA to a bacterial genome. free DNA free DNA recipient cell general rebination 一般重組 (同源重組 ) Transformant 轉(zhuǎn)化子 chromosome General rebination is not necessary because plasmids have origins of replication transformant free DNA (plasmid) TB Griffith in 1928, 肺炎雙球菌轉(zhuǎn)化現(xiàn)象 自然轉(zhuǎn)化的原核生物種類 ? 大腸桿菌 ? 肺炎雙球菌 ? 枯草芽孢桿菌 ? 流感嗜血菌 一、轉(zhuǎn)化作用的發(fā)現(xiàn) Griffith轉(zhuǎn)化研究 (1928) 二、轉(zhuǎn)化作用過程 受體細(xì)胞感受態(tài)出現(xiàn) 轉(zhuǎn)化因子的吸附和滲入 轉(zhuǎn)化因子的整合 感受態(tài)出現(xiàn) ?感受態(tài) (Competence) ：細(xì)菌從周圍環(huán)境吸收 DNA 分子，并且不易被細(xì)胞內(nèi)的限制性內(nèi)切酶分解時所處的一種特殊生理狀態(tài)。如何判斷兩個基因是不是連鎖關(guān)系 ？ ?根據(jù)轉(zhuǎn)化子的產(chǎn)生和供體 DNA的濃度關(guān)系進(jìn)行判斷。 (二 )細(xì)菌接合的三種方式 F plasmid donor cell (F+) F pilus The Fpilus is used for cellcell attachment recipient cell (F) chromosome chromosome ① F+ F Crosses replication and transfer of ssDNA F+ exconjugant F+ Note that the recipient cell bees F+ oriT 胞質(zhì)橋 ① F因子一條單鏈在 oriT（轉(zhuǎn)移和合成位點）打開， 5 ′端通過通道進(jìn)入受體 ②受體細(xì)胞和供體細(xì)胞中兩個單鏈采取滾環(huán)復(fù)制， F因子全部轉(zhuǎn)移。 Mechanism of F’ x F Crosses F’ F’ F’ F’ F’ F F’ F oriT 5′P 3′OH 三、中斷雜交試驗及基因定位 ? 基因定位： 通過遺傳重組等手段確定不同的基因在染色體上的位置及相對距離，從而獲得遺傳圖譜。 ? 噬菌體 T1的單菌釋放量多數(shù)是 100～ 200。 ? 抗性細(xì)菌不帶有噬菌體并且對噬菌體不敏感， ? 敏感細(xì)胞不帶有噬菌體同時對于噬菌體是敏感的， ? 溶源性細(xì)菌本身帶有噬菌體而對于外來的噬菌體則不敏感。 λ ? 在選擇培養(yǎng)基平板上形成微小菌落，受體仍為缺陷型。 ?1） F F不可育， UF UF有少數(shù)可育。 ? 在 天藍(lán)色鏈霉菌和其他鏈霉菌中可采用 異質(zhì)系克隆 進(jìn)行基因定位 ? 例： ? 供體 : + str + + + pro hisC arg (NF) ? 受體 : tps + ura nic cys + hisA + (UF) ? tps磷酸轉(zhuǎn)移酶 / nic煙酰胺 / ura尿嘧啶 ? 圖中內(nèi)部實線圓圈代表 UF菌株染色體 。 ? 轉(zhuǎn)導(dǎo)、轉(zhuǎn)化 則可用于對相隔 很近 的基因進(jìn)行定位，連鎖的二基因間的距離與其共轉(zhuǎn)化，或共轉(zhuǎn)導(dǎo)的頻率成反比，因此，可根據(jù)二個基因被共轉(zhuǎn)化或共轉(zhuǎn)導(dǎo)的頻率判斷它們在染色體上的相對距離 . 第四節(jié) 放線菌遺傳分析 ? 放線菌研究中以 鏈霉菌屬 為主 ? 鏈霉菌屬產(chǎn)生許多重要代謝產(chǎn)物： ? 抗生素（ 70%），水解酶，酶抑制劑 一、鏈霉菌染色體 ? 線形，染色體兩個末端有 IR , 5’ 端有共價結(jié)合蛋白。 ? λdg 入侵 gal細(xì)胞還有一種轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑 ,還能夠整和到受體染色體 DNA上 ,但是通常不穩(wěn)定 ,隨著 λ 脫離受體又形成 gal細(xì)胞 . 溫和噬菌體 λ進(jìn)行局限性轉(zhuǎn)導(dǎo) ? 不穩(wěn)定轉(zhuǎn)導(dǎo)： λdg 攜帶的 gal基因與受體染色體不發(fā)生交換。用來自同一種細(xì)菌的 λ感染時出斑率是 1，這是因為這些噬菌體的 DNA都經(jīng)過這種細(xì)菌的修飾酶的作用而變?yōu)椴辉倌転樗陨淼南拗泼杆纸狻? ? 把 h和 h+噬菌體和大量的野生型細(xì)菌和抗 T2細(xì)菌混合接種。 ? 4）供體菌和受體菌 ： ? 供體菌： ? Hfr： strsthr+leu+azisT1slac+gal+ ? 受體菌 ： ? F strrthrleuazirT1rlacgal ? 將 4 108Hfr和 2 107 F對數(shù)期細(xì)菌混合，培養(yǎng)。