【正文】 常 gal會丟失，所以 轉(zhuǎn)導不穩(wěn)定。 4)高頻轉(zhuǎn)導 ： 局限性轉(zhuǎn)導存在的另外一種轉(zhuǎn)導方式 : λdg和 λ同時感染寄主 (gal)， λ首先整合到受體染色體上， λdg通過單交換整和 , 由于 λ能提自我供復制的所有條件 ,因此 λdg和 λ均能夠大量復制 ,誘導后兩者都可以成熟，從細胞中釋放出來 .其中 50%的轉(zhuǎn)導噬菌體 可轉(zhuǎn)導 gal。 106 雙重溶原菌 ２ .普遍性轉(zhuǎn)導 （ generalized transduction) １）定義：在噬菌體感染末期，細菌染色體被 核酸酶 斷裂成許多小片段，在裝配成熟噬菌體的過程中，少數(shù)噬菌體錯誤的將相應大小的細菌 DNA包裝形成 轉(zhuǎn)導 噬菌體。 ? 由于細菌 DNA任何部分都有可能被包裝， 因此這種噬菌體的轉(zhuǎn)導作用稱 普遍性轉(zhuǎn)導。 2） 普遍性轉(zhuǎn)導的結(jié)果 ? ① 完全轉(zhuǎn)導： 普遍性轉(zhuǎn)導 形成完全不含噬菌體本身 DNA的 假噬菌體 (一種完全缺陷的噬菌體 ) ? 1個完全缺陷的假噬菌體只能感染 1個受體細胞， 受體細胞不會發(fā)生溶原化和裂解。 ? 噬菌體導入的 DNA片段 可與受體染色體組上的 同源區(qū)段 配對，通過 雙交換 ， 整合到受體染色體上與寄主染色體同步復制 ,形成遺傳性穩(wěn)定的轉(zhuǎn)導子。 ? 若受體為 某個基因 缺陷型 ， 交換 后 則恢復正常 . ? 細胞分裂時，由于每一子細胞都有 導入的 DNA片段， 形成的菌落為大菌落 . ② 流產(chǎn)轉(zhuǎn)導： ? 如果受體細菌中缺少 RecA和 RecBC重組蛋白（完全轉(zhuǎn)導需要）， 供體 DNA片段不能整合到受體染色體上，加之本身無獨立復制能力 ,在細胞分裂中，只有一個細胞可獲得導入片段而成為單線傳遞方式 流產(chǎn)轉(zhuǎn)導， 為不穩(wěn)定 轉(zhuǎn)導。 ? 在選擇培養(yǎng)基平板上形成微小菌落，受體仍為缺陷型。 形成微小菌落 轉(zhuǎn)導 DNA不能與受體菌 DNA進行重組并復制，也不迅速消失，（只是借住而已）僅表現(xiàn)穩(wěn)定轉(zhuǎn)錄、轉(zhuǎn)譯、表達的現(xiàn)象。 受體菌進行分裂時，只有一個子細胞獲得這段 DNA，另一子細胞僅獲得供體基因的產(chǎn)物 — 酶，在表型上出現(xiàn)供體菌的某一特征。并且，每經(jīng)過一次分裂，就受到一次“稀釋”。所以，只能在選擇性培養(yǎng)基平板上形成一個微小菌落（即其中只有一個細胞是轉(zhuǎn)導子）。 普遍性轉(zhuǎn)導與局限性轉(zhuǎn)導比較： 比較項目 普遍性轉(zhuǎn)導 局限性轉(zhuǎn)導 轉(zhuǎn)導的發(fā)生 自發(fā) 人工誘導 噬菌體形成 錯誤的裝配 前噬菌體的反常切除 內(nèi)含 DNA 只含宿主染色體 DNA 含噬菌體和宿主 DNA 轉(zhuǎn)導性狀 供體的任何性狀 前噬菌體鄰近兩端的 DNA片斷 轉(zhuǎn)導過程 通過雙交換使轉(zhuǎn)導 DNA替換了受體 DNA同源區(qū) 轉(zhuǎn)導噬菌體插入，使受體菌為部分二倍體 轉(zhuǎn)導子 不能使受體菌溶源化，轉(zhuǎn)導特性穩(wěn)定 為缺陷溶源菌，轉(zhuǎn)導特性不穩(wěn)定 不穩(wěn)定轉(zhuǎn)導 四 、 細菌轉(zhuǎn)導的遺傳分析 ? 接合作用 （中斷雜交）作圖通常判斷相距 較遠 的基因間的相對位置；相隔 很近 連鎖的二基因可能同時轉(zhuǎn)移而無法判斷先后 。 ? 轉(zhuǎn)導、轉(zhuǎn)化 則可用于對相隔 很近 的基因進行定位，連鎖的二基因間的距離與其共轉(zhuǎn)化，或共轉(zhuǎn)導的頻率成反比，因此，可根據(jù)二個基因被共轉(zhuǎn)化或共轉(zhuǎn)導的頻率判斷它們在染色體上的相對距離 . 第四節(jié) 放線菌遺傳分析 ? 放線菌研究中以 鏈霉菌屬 為主 ? 鏈霉菌屬產(chǎn)生許多重要代謝產(chǎn)物： ? 抗生素（ 70%），水解酶，酶抑制劑 一、鏈霉菌染色體 ? 線形，染色體兩個末端有 IR , 5’ 端有共價結(jié)合蛋白。 ? 1977年英國對天藍色鏈霉菌 A3(2)M145菌株基因組進行全部測序，全長 8Mb，含 7000個基因。平均每個基因 圖 一、 鏈霉菌基因重組發(fā)現(xiàn) ? 1955年 Sermonti夫婦發(fā)現(xiàn)天藍色鏈霉菌可通過遺傳重組交換產(chǎn)生重組體。 ? Hopwood也在 天藍色鏈霉菌 A3(2)菌株中證實了這一作用。 ? 鏈霉菌基因重組 方式 接合作用。 將兩個不同營養(yǎng)缺陷型混合培養(yǎng)，使基內(nèi)菌絲融合； 一個菌絲的 部分染色體 進入另一菌絲形成 局部雜合核 。雜合核有兩套染色體，供體染色體不完整，受體的完整。 局部雜合核 在細胞分裂中發(fā)生染色體交換，結(jié)果形成單倍重組孢子。 ? 異質(zhì)系克隆 ：由 雜合核 演化繁殖形成的菌落為異質(zhì)系克隆。 鏈霉菌接合 過程 二、天藍色鏈霉菌性別體制 和遺傳重組 天藍色鏈霉菌性別體制 ? SCPI： 鏈霉菌中最早發(fā)現(xiàn)的與遺傳重組有關的 致育因子 （相當于大腸桿菌 F因子） ? SCPI控制 天藍色鏈霉菌的致育狀態(tài) 。 ?1） F F不可育， UF UF有少數(shù)可育。說明還有另外的致育因子 SCP2。 ? 2） F+ F+和 Hfr Hfr不可育 , NF NF 和 IF IF部分可育。 天藍色鏈霉菌與大腸桿菌致育類型的區(qū)別： 3 ） 大腸桿菌： F+ F育后代為 F+， Hfr F后代 F ， ? 天藍色鏈霉菌： IF UF后代 IF ， NF UF后代 NF，說明 NF染色體轉(zhuǎn)移包括致育因子 SCPI ? 在 NF UF中，以 SCPI整合位點為中心，帶動染色體高頻雙向轉(zhuǎn)移，每次轉(zhuǎn)移都包括 SCPI區(qū)域基因， ? 或者是環(huán)形染色體在 SCPI一端斷裂，從帶有 SCPI一端開始轉(zhuǎn)移。 ? 在轉(zhuǎn)移過程中 ，轉(zhuǎn)移的兩個方向隨時發(fā)生斷裂，每個細胞得到 NF不同片段。 ? 圖 158 三 、 鏈霉菌遺傳分析方法 ? 異質(zhì)系產(chǎn)生 ：由供體染色體片段進入受體細胞形成雜合核，在細胞分裂中供體和受體染色體通過 兩次單交換 實現(xiàn)整合。 ? 在 天藍色鏈霉菌和其他鏈霉菌中可采用 異質(zhì)系克隆 進行基因定位 ? 例： ? 供體 : + str + + + pro hisC arg (NF) ? 受體 : tps + ura nic cys + hisA + (UF) ? tps磷酸轉(zhuǎn)移酶 / nic煙酰胺 / ura尿嘧啶 ? 圖中內(nèi)部實線圓圈代表 UF菌株染色體 。外面實線代表 NF ? 染色體片段 。首先在 b區(qū)發(fā)生第一次單交換 。然后可以在abcdef 等區(qū)發(fā)生第二次單交換 。第二次交換發(fā)生在 a區(qū)，所得染色體包括幾乎全部 UF基因。 受體 UF 供體 NF 兩次單交換 實現(xiàn)整合 ?放線菌基因重組 ?天藍色鏈霉菌性別體制 天藍色鏈霉菌與大腸桿菌致育類型的區(qū)別： 遺傳重組 異質(zhì)系產(chǎn)生