【正文】 很難靶向這些基因。該 rHDL納米粒的組成部分有磷脂酰膽堿，載脂蛋白 A 1 ，膽固醇和膽甾醇酯（圖 1A）。因此， 需要新型，更具有特定性的方法以 系統(tǒng)遞 送 siRNA。這里 ,我們證實 rHDL納米粒子促進了 siRNA體內(nèi)高效遞送。本文利用這種細胞特性來實現(xiàn)高效 siRNA遞送， 通過 siRNA偶聯(lián)重組成 HDL(rHDL)納米粒子建立一種新型的 siRNA制劑 。雖然 一些 使用脂質(zhì)體或其它納米粒子的跨膜轉(zhuǎn)運方法也已經(jīng)報道， 但是因 毒性和其他因素其治療應(yīng)用受到限制。重組 HDL是由人的 HDL合成得到的。因此，考慮到SR B1在 HDL中的作用，我們認為 rHDL納米?？梢宰鳛檫x擇性輸送的有效載體。概念證明，我們在卵巢癌和大腸癌模型中證實使用 r HDL納米粒靶向 STAT3和 FAK治療有效性。載脂蛋白 A I（ ）溶于 加入到混合物中，終體積用 PBS 調(diào)整到 2ml 。得到的圖片有所增強，粒徑可通過 Adobe ImageCS2 軟件檢測 。 C， 5% CO2/95%的孵箱中。簡單地說， SKOV3ip1和 HeyA8 MDR卵巢癌細胞系在一式三份的六孔板用 g 特定 siRNA/孔進行轉(zhuǎn)染，在 70 ％處匯合。 聚合酶鏈反應(yīng) 分析 反轉(zhuǎn)錄聚合酶連鎖反應(yīng) (RTPCR)可以利用 cDNA 預(yù)先形成正常人體器官和癌癥細胞系。主要抗體通過抗鼠免疫球蛋白 G 和化學(xué)發(fā)光檢測試劑盒檢測。 TUNEL 染色 取新鮮冷凍的實驗組 (SKOV3ip1模型 )腫瘤組織部分，通過末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的脫氧尿苷三磷酸缺口尾部標(biāo)記進行末端染色，再用 1:10,000的 Hoechst進行復(fù)染。原位卵巢癌模型雌性裸鼠（ 10? 12周齡）購自美國美國國家癌癥研究所。 4周后，解剖小鼠，收集腫瘤 體內(nèi)沉默 STAT3或 FAK 基因的有效劑量通過在 SKOV3ip1模型小鼠注入劑量范圍為 ? 測定。 結(jié)果 包含 RNAi 的 rHDL 納米粒的制備 因為 RNAi 分子是高度離子化 ,主要是因為磷酸基團帶負電荷，我們設(shè)計 了一個新穎制劑是將 siRNA 偶聯(lián)到 rHDL 里。此外，我們檢測在人類正常器官的 SRB1表達并用 RTPCR分析乳腺癌、直腸癌、胰腺癌和卵巢癌細胞系的表達 (圖 W1)。為了解決這個問題 ,，我們首先分析了用 Alexa555標(biāo)記 siRNA / rHDL 納米粒處理的小鼠器官 (圖 W2)。根據(jù)這個實驗，我們在后續(xù)實驗中使用 。與對照組比較， STAT3 siRNA / rHDL 和多烯紫杉醇的聯(lián)合治療使腫瘤重量減少的最多 (92%， P )。我們在每一個治療組的動物的局部轉(zhuǎn)移頻率進行了分析。為了評估 rHDL 納米粒的安全性，我們評估用 rHDL 納米粒處理小鼠的幾個參數(shù)（圖 W5 ） 。在 SKOV3ip1卵巢癌模型中 (圖 3), STAT3基因沉默減少 26%細胞增殖 (P )，而多烯紫杉醇抑制 30%腫瘤細胞增殖 (P )。 眾所周知， STAT3被認為是增加細胞存活和抑制細胞凋亡。 STAT3基因沉默的程度與兩個模型保持一致。此外，在 HeyA8MDR 細胞多烯紫杉醇治療沒有產(chǎn)生顯著凋亡 (圖 5 b) 然而 ,STAT3沉默后增加多烯紫杉醇，比對照組相比可增加 175%(P )的細胞凋亡，與單獨多烯紫杉醇治療可增加 98%的細胞凋亡 (P 0. 05)。因此 , 比起其他方法，靶向性遞送系統(tǒng)克服這些障礙更理想。 概念驗證，我們證實了多種臨床前模型成功靶向兩個關(guān)于癌癥生長和增殖重要的基因。 此外，其他實體瘤中， FAK 在直腸癌、乳腺癌、卵巢癌、甲狀腺、前列腺癌上過度表達這一點也曾報道過。E represents the an morphology 基于脂蛋白納米載體的小干擾 RNA 靶向遞送方法研究 Figure and FAK silencing with siRNA/rHDL. (A) STAT3 siRNA treatment (in vitro) in SKOV3ip1 ovarian cancer cells. (B)STAT3 siRNA/rHDL. (C) FAK siRNA/rHDL was injected in mice bearing SKOV3ip1 ovarian tumors. Western blot analysis demonstrates relative protein expression. Graphs represent mean expression intensity measured with densitometry 基于脂蛋白納米載體的小干擾 RNA 靶向遞送方法研究 Figure vivo effect of STAT3 siRNA/rHDL with and without docetaxel therapy on tumor nodules in (A) HeyA8 and SKOV3 and (B) HeyA8MDR ovarian cancer models. The average number of tumor nodules is presented as a bar graph. Error bars, SEM. Threedimensional graph depicts the distribution of ovarian tumor metastasis in HeyA8MDR (Taxolresistant) ovarian cancer model 基于脂蛋白納米載體的小干擾 RNA 靶向遞送方法研究 Figure of rHDL nanoparticles. (A) Body weights. (B) Liver function tests (LFTs) measured at the end of therapy experiment from all treatment groups are reported (for LFTs, AST and ALT ratio is presented). (C) Immunohistochemistry (IHC) performed on ans after a longterm therapy experiment. Representative images of IHC from each treatment group are presented 基于脂蛋白納米載體的小干擾 RNA 靶向遞送方法研究 Figure of rHDLincorporated STAT3 siRNA on tumor microenvironment. Tissues harvested after STAT3 siRNA/rHDL therapy from HeyA8MDR ovarian cancer mouse model were subjected to immunohistochemistry for markers of proliferation (Ki67), angiogenesis (CD 31), and apoptosis (cleaved caspase3). For the analysis, five random fields per slide were examined with light microscopy and number of average number of microvessels (MVD) or the number of cells positive (Ki67 and cleaved caspase3) and nuclei are reported as average percent positive cells (200). Error bars, SEM. 基于脂蛋白納米載體的小干擾 RNA 靶向遞送方法研究