【正文】 命科學研究 ， 20xx， 10(1)： 1216. [20]Robb V A， Li W， Gutmann D of 1433 binding does not impair Protein 31 B growth suppression[J].Ontogeny， 20xx， 23(20)： 35893596. [21]曾益坤 ， 胡文龍 .山茶油冷凍脫脂工藝的研究 [J].中國油脂 ， 20xx， 30(4)： 1517. 。這說明 染色過程中，油脂和蛋白質(zhì) 等雜質(zhì)的存在，對有機玻璃染色 存在 不利的影響。 槲皮素及蘆丁分子結(jié)構(gòu) 見圖 和圖。 (2)高溫脫去蛋白質(zhì) 將脫脂后的提取液分別用恒溫水浴加熱至 45℃ ，并保溫 1h，高溫處理完成后以20xx minr 高速離心得到去除蛋白質(zhì)的提取液，將提取液和固體殘渣分離，靜置一夜觀察處理后的提取液的色澤及澄清度，取適量上層清液用紫外分光光度計測其在190nm900nm 波長范圍內(nèi)的光譜。 (1)差速離心：又叫分級離心法，是生化分離中最為常用的離心分離方法。隨著生命科學技術(shù)的發(fā)展，離心分離技術(shù)已成為生物化學與分子生物學中不可缺少的分離技術(shù)手段。適當?shù)臄嚢?，可使油脂中各處冷卻均勻 ， 使已經(jīng)析出的脂晶與將要析出的脂分子碰撞 ， 有利于晶粒的形成和長大。固體脂的結(jié)晶可分為 3 個階段 ： 一是油脂的冷卻、過飽和 ； 二是晶核的形成 ； 三是脂晶的成長。 (4)利用對配體的特異親和力進行分離純化 親和層析是利用蛋白質(zhì)分子對其配體分子特有的識別能力 (即生物學親和力 )建立起來的一種有效的純化 方法。離子交換層析中 ， 基質(zhì)由帶有電荷的樹脂或纖維素組成。聚丙烯酰胺電泳是一種以聚丙烯酰胺為介質(zhì)的區(qū)帶電泳 ， 常用于分離蛋白質(zhì)。目的蛋白常分布在上相并得到濃縮 ， 細胞碎片等固體物分布在下相中。因 此 ， 通常要將有機溶劑冷卻 ， 然后在不斷攪拌下加入有機溶劑防止局部濃度過高 ， 蛋白質(zhì)變性問題就可以很大程度上得到解決。在葡萄籽蛋白提取工藝中除了可以利用堿溶法還可以利用鹽溶法來提取蛋白質(zhì) ， 其最佳提取工藝是 ： 以 10%NaCl 溶液 ， 按 1∶ 25 的料液比 ， 在 30℃ 攪拌提取 30min， 蛋白質(zhì)提取率為 %。李殿寶在從葵花脫脂粕中提取蛋白質(zhì)時將蛋白溶液的 pH 值調(diào)到 3～ 4， 使目標蛋白于等電點沉淀出來。凝膠過濾在抗凝血蛋白的提取過程中也被用來除去大多數(shù)雜蛋白及小分子的雜質(zhì)。常用的密度梯度有蔗糖梯度、聚蔗糖梯度和其它合成材料的密度梯度。這兩種方法都可以將蛋白質(zhì)大分子與以無機鹽為主的小分子分開。只要我們能把自己的天然色素做到標準化、系列化、實用化 ， 一定能培養(yǎng)出中國這個大市場 ，這已經(jīng)為火腿腸使用紅曲紅和餅干噴涂辣椒紅的中國市場所證明。用高粱殼生產(chǎn)高粱紅 ； 用葡萄皮渣生產(chǎn)葡 萄色素等 ， 原料低廉。就某一個天然色素而言 ， 一個企業(yè)也沒有完全做到標準化、系列化 ， 缺欠實用技術(shù)的開發(fā)。 (2)提高技術(shù)與裝備水平 ， 促進天然色素 的生產(chǎn) 天 然 色素 的生產(chǎn)應(yīng)當采用高新技術(shù) ， 不斷提高裝備水平 ， 提高產(chǎn)品的產(chǎn)量和質(zhì)量 ， 降低成本 ， 從而提高產(chǎn)品在國內(nèi)外市場的競爭力。 同時由于人們對化學合成色素危害性認知的增加， 天然產(chǎn)物 具有的天然和健康屬性 ， 使天然 色素 的種類和市場需求量大幅度增加 ， 而且色素品種逐漸由合成色素轉(zhuǎn)變?yōu)樘烊簧?， 但目前天然色素的開發(fā)生產(chǎn)遠6 不能滿足現(xiàn)代工業(yè)發(fā)展的需要 ， 開發(fā)新品種的天然色素 ， 探索新的天然色素來源 ， 對原有天然色素的生產(chǎn)工藝進行改進 ， 擴大天然色素的應(yīng)用范圍 ， 降低天然色素的生產(chǎn)成本 ， 已成為添加劑行業(yè)和研究者們非常迫切的問題。據(jù) 1998 年下半年統(tǒng)計 ， 我國食用色素的年產(chǎn)量約 萬 噸 。 我國天然 產(chǎn)物 的 應(yīng)用現(xiàn)狀 我國疆域遼闊 ， 有著天然 產(chǎn)物 生產(chǎn)所需的豐富植物資源 ， 在發(fā)展天然 產(chǎn)物 方面具有一定的優(yōu)勢。對于熱不穩(wěn)定性或極性大的天然 產(chǎn)物 來說 ， HPLC 是一種有效的分離分析方法。該技術(shù)具有蒸餾溫度低 ， 蒸餾壓力低 ， 分離程度高 ， 受熱時間短等特點 ， 因而能大大降低高沸點物料的分離成本 ， 極好地保護熱敏性物料的品質(zhì) ， 真正保持了純天然的特性。 (3)超臨界 2CO 流體萃取法 超臨界二氧化碳流體萃取是近二十年發(fā)展起來的一種新型物質(zhì)分離、精制技術(shù)。 3 (1)有機溶劑提取法 溶劑提取法是目前從動植物中提取色素的一種常用的方法。并 且天然產(chǎn)物 由于其 安全性高 ， 已成為醫(yī)藥、食品和 飼料 等 的重要來源 [12]。 關(guān)鍵詞： 天然產(chǎn)物 ； 加熱 ； 冷凍 ； 除雜 II Remove Test of Protein and Fat and other Impurities from natural product extraction Abstract： The extraction of jasmine and forsythia flower was treated by using protein molecule thermal denaturation and the principle of low temperature defatted, the effect of removing impurities was studied by the difference of the UV absorption spectroscopy between the untreated extraction and treated extraction and by the difference of High Performance Liquid Chromatography (HPLC) between the untreated extraction and treated extraction ,and also by the effect contrast of dyeing the anic glass. The experimental results show that the protein and fat and other macromolecule impurities in natural product extraction can be effectively removed by being frozen, heated and centrifugally separated. The conditions of removing impurity are 3℃ for six hours, 45℃ for one hour, 20xx r/min for fifteen minutes. Key word： Natural products。 除雜的條件是， 3℃ 6 小時， 45℃ 60 分鐘， 20xx 轉(zhuǎn) /分 離心 15 分鐘 。其中主要包括蛋白質(zhì)、多肽、氨基酸、核酸、各種酶類、單糖、寡糖、多糖、糖蛋 白、樹脂、膠體物、木質(zhì)素、維生素、脂肪、油脂、蠟、生物堿、揮發(fā)油、黃酮、糖苷類、萜類、苯丙素類、有機酸、酚類、醌類、內(nèi)酯、甾體 化合物、鞣酸類、抗生素類等天然存在的化學成分，其中許多有效成分是預防和治療疾病、調(diào)節(jié)身體的物質(zhì)基礎(chǔ)。 天然 產(chǎn)物 的提取方法 發(fā)展至今，天然 產(chǎn)物 的提取方法常見的有有機溶劑提取法、堿液提取法、超臨界提取法、微波萃取法等幾種方法。由于堿提法加工過程需消耗大量酸堿 ， 且廢液較難回收 ， 因此近幾年來對堿提法的研究報道較少。 (5)分子蒸餾技術(shù) 分子蒸餾是一種特殊的液 液分 離技術(shù) ， 其基本原理是基于不同物質(zhì)分子在高真空下分子運動平均自由程的差別 ， 在遠低于物質(zhì)常壓沸點溫度的條件下將其分離出來。該技術(shù)具有分離效率高 ，分析速度快 ， 用樣量少 ， 靈敏度高 ， 流出組分可收集 ， 兼具分析和制備等優(yōu)點 ， 適應(yīng)于高沸點、大分子、強極性和熱穩(wěn)定性差的化合 物的分離分析。該法工藝簡單 ，效能高 [11]。目前 ， 我國已推出品種繁多的天然食用色素 ， 諸如 ， 姜黃色素、葉綠素銅鈉鹽、紅藥子黃色素、玉米黃色 素、紅曲色素粉、高粱紅色素、棗紅色素、桅子黃色素、辣椒紅色素、紅花黃色素等 ， 均受到廣大食品廠家的青睞。中 國天然 產(chǎn)物 的發(fā)展將為我國進人一日三餐的加工食品增加更多的色彩和安全感。我國天 然色素資源豐富 ， 進一步開發(fā)、研究、生產(chǎn)、應(yīng)用功能性天然色素大有潛力。多數(shù)工廠所生產(chǎn)的是原料型的天然色素 ， 一般不能直接使用 ， 因而價格低 ， 經(jīng)濟效益不高。目前許多天然紅色素 ， 如紅高粱、酸棗色、葡萄皮紅等 ， 都是從農(nóng)產(chǎn)品的廢棄物中提取的。一些外國的有識之士也十分重視這個市場。超濾是利用離心力或壓力強行使水和其它小分子通過半透膜 ， 而蛋白質(zhì)被截留在半透膜上的過程。 使蛋白質(zhì)在具有密度梯度的介質(zhì)中離心的方法稱為密度梯度 (區(qū)帶 )離心。在甘露糖蛋白提純的過程中使用凝膠過濾方法可以得到很好的效果 ， 純度鑒定證明產(chǎn)品為分子量約為 32kDa、成分是多糖 ∶ 蛋白質(zhì) (88∶ 12)、多糖為甘露糖的單一均勻糖蛋白 [14]。王洪新等 [15]研究茶葉蛋白質(zhì)提取過程發(fā)現(xiàn) ， pH 值為 4 時茶葉蛋白提取效果最好 ， 提取率達到 %， 初步純化得率為 %。應(yīng)當指出 ， 同樣濃度的二價離子中性鹽 ， 如 2MgCl 、4 2 4()NH SO 對蛋白質(zhì)溶解度影響的效果 ， 要比一價離子中性鹽如 NaCl 、 4NHCl 大得多。由于在室溫下 ， 有機溶劑不僅能引起蛋白質(zhì)的沉淀 ， 而且伴隨著變性。對于細胞內(nèi)的蛋白質(zhì) ， 需要先對細胞進行有效破碎。 在外電場的作用下 ， 帶電顆粒 (如不處于等電點狀態(tài)的蛋白質(zhì)分子 )將向著 與其電性相11 反的電極移動 ， 這種現(xiàn)象稱為電泳。 離子交換層析 (Ion exchange chromatography ， IEC)是以離子交換劑為固定相 ， 依據(jù)流動相中的組分離子與交換劑上的平衡離子進行可逆交換時結(jié)合力大小的差別而進行分離的一種層析方法。另外 ， 離子交換層析還用于抗凝血蛋白的提取。 12 冷凍脫脂的原理及影響因素 冷凍脫脂原理 天然 脂 類 中不同類型的甘三酯的熔點有一定的差異 ， 隨著溫度的降低固體脂 在有機溶劑中的 溶度降低 ， 因此通過 降溫 冷卻能促使固體脂結(jié)晶 ， 然后進行固液分離即可達到脫脂的目的 。三是攪拌速度。離心分離生物分子是最常用的生化分離方法，因為不同的生物分子有不同的體積和密度，可在不同離心力的作用下沉降分離。 常用 離心方法 根據(jù)離心方式的不同，可分為差速離心法和密度梯度離心等。 15 實驗方法 粗提取液 純化 (1)冷凍脫脂 分別取迎春花、連翹花粗取液各 50ml 于兩個燒杯中，貼上標簽置于冰箱中按設(shè)定溫度 3℃ 進行低溫處理 ， 低溫處理完成以 20xx minr 轉(zhuǎn)速高速離心得到除去脂肪后的提取液，分別將離心后所得提取 液與固體殘渣分離，觀察處理后的提取液的色澤及澄清度，取適量上層清液用紫外分光光度計測其在 190nm900nm 波長范圍內(nèi)的光譜 。 迎春花和連翹花樣品實物圖見圖 和圖 。 100 200 300 400 500 600 700 800 900020406080100T%w a v e l e n g t h (n m ) 原液空白 處理后 圖 迎春花對有機玻璃上色紫外光譜圖 28 100 200 300 400 500 600 700 800 900020406080100T%w a v e l e n g t h (n m ) 空白 原液 處理后 圖 連翹花對有機玻璃上色紫外光譜圖 從圖 中可以看出，除雜后染色效果 加