mtt法檢測細胞活力講解(更新版)
【正文】 ，共二十四頁。在呈色后，盡量吸凈培養(yǎng)孔內剩余培養(yǎng)液。 第十六頁，共二十四頁。切記！否那么，可能你用的時間和濃度根本不是藥物的有效濃度和時間。一般情況下， 96孔培養(yǎng)板的一內貼壁細胞長滿時約有 105個細胞。 舉例 ? 藥物濃度 、 、 、 、 、稀釋倍數為 10，最大濃度為 ，抑制率為、 、 、 、 ， 。 藥物的配制 ? 濃度 ? 體積 ? 過濾 第八頁，共二十四頁。 〔培養(yǎng)基、 MTT、二甲基亞砜〕，對照孔〔細胞、培養(yǎng)液、 MTT、二甲基亞砜〕 第六頁，共二十四頁。原那么上，細胞貼壁后即可加藥，每孔加藥10 ul，一般設 5個復孔。 原理 ? 四唑鹽〔噻唑藍〕是一種能接受氫原子的染料，簡稱 MTT ? 活細胞的線粒體中的琥珀脫氫酶能使外源性的 MTT復原為難溶性的藍紫色結晶物并沉積在細胞中，而死細胞無此功能。 第三頁，共二十四頁。 4. 每孔參加 10ul MTT溶液〔 5mg/ml，即 %MTT〕，繼續(xù)培養(yǎng) 4h。同時設置調零孔〔培養(yǎng)基、 MTT、二甲基亞砜〕，對照孔〔細胞、培養(yǎng)液、 MTT、二甲基亞砜〕，每組設 5個復孔。尤其當 MTT變?yōu)榛揖G色時就絕對不能再用了。 在進行 MTT試驗前，對每一種細胞都應測其貼壁率、倍增時間以及不同接種細胞數條件下的生長曲線，然后確定試驗中每孔的接種細胞數和培養(yǎng)時間。否那么細胞數太多敏感性降低，太少觀察不到差異。 第十五頁，共二十四頁。對照孔和加藥孔都要加細胞、培養(yǎng)液、MTT、二甲基亞砜，不同的是對照孔加溶解藥物的介質，而加藥組參加不同濃度的藥物。培養(yǎng)板要用好的〔最好進口板〕，不好的板或重復利用的板只可做預實驗。 ? 注意細胞懸液一定要混勻，已防止細胞沉淀下來，導致每孔中的細胞數量不等，可以每接幾個就要再混勻一下。 第二十頁，共二十四頁。如果各個孔的孔間差異性特別明顯的話說明有可能存在污染 ,空白孔的 OD值太高，很可能是細菌污染。
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