mtt法檢測(cè)細(xì)胞活力講解(更新版)
【正文】 ，共二十四頁(yè)。在呈色后，盡量吸凈培養(yǎng)孔內(nèi)剩余培養(yǎng)液。 第十六頁(yè)，共二十四頁(yè)。切記！否那么，可能你用的時(shí)間和濃度根本不是藥物的有效濃度和時(shí)間。一般情況下， 96孔培養(yǎng)板的一內(nèi)貼壁細(xì)胞長(zhǎng)滿時(shí)約有 105個(gè)細(xì)胞。 舉例 ? 藥物濃度 、 、 、 、 、稀釋倍數(shù)為 10，最大濃度為 ，抑制率為、 、 、 、 ， 。 藥物的配制 ? 濃度 ? 體積 ? 過(guò)濾 第八頁(yè)，共二十四頁(yè)。 〔培養(yǎng)基、 MTT、二甲基亞砜〕，對(duì)照孔〔細(xì)胞、培養(yǎng)液、 MTT、二甲基亞砜〕 第六頁(yè)，共二十四頁(yè)。原那么上，細(xì)胞貼壁后即可加藥，每孔加藥10 ul，一般設(shè) 5個(gè)復(fù)孔。 原理 ? 四唑鹽〔噻唑藍(lán)〕是一種能接受氫原子的染料，簡(jiǎn)稱(chēng) MTT ? 活細(xì)胞的線粒體中的琥珀脫氫酶能使外源性的 MTT復(fù)原為難溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶物并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無(wú)此功能。 第三頁(yè)，共二十四頁(yè)。 4. 每孔參加 10ul MTT溶液〔 5mg/ml，即 %MTT〕，繼續(xù)培養(yǎng) 4h。同時(shí)設(shè)置調(diào)零孔〔培養(yǎng)基、 MTT、二甲基亞砜〕，對(duì)照孔〔細(xì)胞、培養(yǎng)液、 MTT、二甲基亞砜〕，每組設(shè) 5個(gè)復(fù)孔。尤其當(dāng) MTT變?yōu)榛揖G色時(shí)就絕對(duì)不能再用了。 在進(jìn)行 MTT試驗(yàn)前，對(duì)每一種細(xì)胞都應(yīng)測(cè)其貼壁率、倍增時(shí)間以及不同接種細(xì)胞數(shù)條件下的生長(zhǎng)曲線，然后確定試驗(yàn)中每孔的接種細(xì)胞數(shù)和培養(yǎng)時(shí)間。否那么細(xì)胞數(shù)太多敏感性降低，太少觀察不到差異。 第十五頁(yè)，共二十四頁(yè)。對(duì)照孔和加藥孔都要加細(xì)胞、培養(yǎng)液、MTT、二甲基亞砜，不同的是對(duì)照孔加溶解藥物的介質(zhì)，而加藥組參加不同濃度的藥物。培養(yǎng)板要用好的〔最好進(jìn)口板〕，不好的板或重復(fù)利用的板只可做預(yù)實(shí)驗(yàn)。 ? 注意細(xì)胞懸液一定要混勻，已防止細(xì)胞沉淀下來(lái)，導(dǎo)致每孔中的細(xì)胞數(shù)量不等，可以每接幾個(gè)就要再混勻一下。 第二十頁(yè)，共二十四頁(yè)。如果各個(gè)孔的孔間差異性特別明顯的話說(shuō)明有可能存在污染 ,空白孔的 OD值太高，很可能是細(xì)菌污染。
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