mtt法檢測細(xì)胞活力講解-免費(fèi)閱讀
【正文】 5. 終止培養(yǎng)，小心吸去孔內(nèi)培養(yǎng)液。 OD值的測定 ? 至于測定波長的選擇是因顯色溶液而異的。 第十九頁，共二十四頁。 懸浮細(xì)胞每孔的細(xì)胞數(shù)可到達(dá) 105,貼壁細(xì)胞可為 103104。因此，一般選小于 10％胎牛血清的培養(yǎng)液進(jìn)行。 做 MTT時，盡量無菌操作，因為細(xì)菌也可以導(dǎo)致 MTT比色 OD值的升高。根據(jù)自己初篩的結(jié)果縮小濃度和時間范圍再細(xì)篩。 實驗前應(yīng)明確的問題 ? 。 公式如下： lgIC50=XmI(P(3PmPn)/4) Xm:lg 最大劑量 I:lg(最大劑量 /相臨劑量 ) P:陽性反響率之和 Pm:最大陽性反響率 Pn:最小陽性反響率 第十一頁，共二十四頁。 第七頁，共二十四頁。在酶聯(lián)免疫檢測儀 OD490nm處測量各孔的吸光值。 2. 培養(yǎng)細(xì)胞：將培養(yǎng)板移入 CO2孵箱中，在 37℃ 、 5% CO2及飽和濕度條件下培養(yǎng)，至細(xì)胞單層鋪滿孔底〔 96孔平底板，大約 12h〕，參加濃度梯度的藥物。 MTT法目的和意義 檢測細(xì)胞存活和生長情況 用于評價藥物產(chǎn)生的細(xì)胞毒作用 第二頁，共二十四頁。 活細(xì)胞 +MTT 琥珀酸脫 氫酶 紫藍(lán)色結(jié)晶物 Formazan 第四頁，共二十四頁。假設(shè)藥物與 MTT能夠反響，可先離心后棄去培養(yǎng)液，小心用 PBS沖 23遍后，再參加含 MTT的培養(yǎng)液。 ? 2〕置 37℃ ， 5%CO2孵育 24小時，倒置顯微鏡下觀察。 ? MTT有致癌性，用的時候小心 ,有條件最好帶那種透明的簿膜手套 .配成的MTT需要無菌， MTT對菌很敏感；往 96孔板加時不避光也沒有關(guān)系，因為時間較短。 2． 設(shè)空白對照， 與試驗平行設(shè)不加細(xì)胞只加培養(yǎng)液的空白對照孔。 第十四頁，共二十四頁。 。 。 ? 接種時最好按照預(yù)實驗摸索出的密度接種 , 且而細(xì)胞過密或者過少，增殖都會過快或者過慢，其增
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