mtt法檢測細(xì)胞活力講解(文件)
【正文】 后得到不同時(shí)間點(diǎn)的抑制率變化情況，畫出變化的曲線，曲線什么時(shí)候變得平坦了〔到了平臺(tái)期〕那個(gè)時(shí)間點(diǎn)應(yīng)該就是最好的時(shí)間點(diǎn)〔因?yàn)檫@個(gè)時(shí)候的細(xì)胞增殖抑制表現(xiàn)的最明顯〕。 ，不能測定細(xì)胞絕對(duì)數(shù)。調(diào)零孔加培養(yǎng)基、MTT、二甲基亞砜。由于試驗(yàn)本底增加，會(huì)試驗(yàn)敏感性。 關(guān)于細(xì)胞的接種 (鋪板 ) ? 細(xì)胞過了 30代以后就不要用了 。 ? 細(xì)胞密度要根據(jù)不同細(xì)胞的特點(diǎn)來定。特別是新手， 20％的波動(dòng)也是常見的，所以很可能是技術(shù)原因引起的，特別是種板技術(shù)一定要過關(guān)。所以要熟練鞋、快些上板?？梢暂p拍，或者傾斜一點(diǎn)幫助吸液，但前提是細(xì)胞貼壁要比較牢。 第二十一頁，共二十四頁。 ? 細(xì)胞密度偏大測出的吸光度也會(huì)偏大，細(xì)胞密度小吸光度也會(huì)偏??；另外跟細(xì)胞狀態(tài)也有關(guān)系，細(xì)胞狀態(tài)不好的話，吸光度值也會(huì)低的；細(xì)胞數(shù)目少，或者是培養(yǎng)的時(shí)間短， OD值也會(huì)偏低。 內(nèi)容總結(jié) MTT法檢測細(xì)胞活力。但由于不同細(xì)胞貼壁后面積差異很大，因此，在進(jìn)行 MTT試驗(yàn)前，要進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)檢測其貼壁率、倍增時(shí)間以及不同接種細(xì)胞數(shù)條件下的生長曲線，確定試驗(yàn)中每孔的接種細(xì)胞數(shù)和培養(yǎng)時(shí)間，以保證培養(yǎng)終止致細(xì)胞過滿 第二十四頁，共二十四頁。 〔培養(yǎng)基、 MTT、二甲基亞砜〕，對(duì)照孔〔細(xì)胞、培養(yǎng)液、 MTT、二甲基亞砜〕。 第二十二頁，共二十四頁。對(duì)于 DMSO，溶解后呈紫〔紅〕色， 490nm有最大吸收值 。 參加 DMSO ? 在同一批實(shí)驗(yàn)中最好不要更換 DMSO。 如何去除上清 ? 直接吸出：加 DMSO前要把液體吸掉，但培養(yǎng)液里的紫色結(jié)晶可能會(huì)吸去，可在這之前先用平板離心機(jī)離心 96孔板， 2024r， 5分鐘，然后吸掉上清 (如果是懸浮細(xì)胞，那么推薦此法 ,懸浮細(xì)胞要離心2500rpm MTT最好用圓底型 96孔板 ,去除上清時(shí)注意不要把下面的結(jié)晶顆粒吸掉 ,建議各孔吸棄 150160ul即可 )。加樣器操作要熟練，盡量防止人為誤差。 第十八頁，共二十四頁。
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