mtt法檢測細(xì)胞活力講解-文庫吧在線文庫
【正文】 4/ml，每孔先加細(xì)胞懸液90ul,相應(yīng)梯度的藥物每孔 10ul；共 100ul參加到 96孔板〔邊緣孔用 PBS填充〕。 MTT的配制 ? MTT一般最好現(xiàn)用現(xiàn)配，過濾后 4186。代入 計(jì)算公式： Pm= Pn= P=+++++= Xm==1 lgI=lgIC50=11*(()/4)= IC50= 第十二頁，共二十四頁。但由于不同細(xì)胞貼壁后面積差異很大，因此，在進(jìn)行 MTT試驗(yàn)前，要進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)檢測其貼壁率、倍增時(shí)間以及不同接種細(xì)胞數(shù)條件下的生長曲線，確定試驗(yàn)中每孔的接種細(xì)胞數(shù)和培養(yǎng)時(shí)間，以保證培養(yǎng)終止致細(xì)胞過滿。 3. 時(shí)間點(diǎn)的設(shè)定。 ，對(duì)照孔，加藥孔。 第十七頁，共二十四頁。 ? MTT本身就是比較粗的實(shí)驗(yàn)，增殖率 10%左右的波動(dòng)都不算奇怪。 ? 翻轉(zhuǎn)倒扣法：可以直接將板翻轉(zhuǎn)倒扣〔墊幾層濾紙〕 2－ 3次，比用“吸〞的方法更不容易使細(xì)胞脫離出來。 ? ? DMSO溶后 10分鐘內(nèi)測，越放顏色越深，而ＳＤＳ做為溶解液測吸收光值，其值可在三天內(nèi)保持不變。抑制率 % =。 謝謝觀看 第二十三頁，共二十四頁。加 DMSO前把孔中液體盡量棄干凈如果培養(yǎng)液沒棄干凈，空白孔也要留有等量的培養(yǎng)液，這樣在檢測時(shí)可以盡量去除培養(yǎng)液的影響， DMSO的量也可為 100ul或 150ul. ? 加了 DMSO后用振蕩器輕輕振蕩 5－ 10min, 時(shí)間控制盡量嚴(yán)格一點(diǎn) ,放置時(shí)間長了會(huì)影響結(jié)果 ,值會(huì)偏大 ,且結(jié)果不可信 . ? 參加 DMSO溶解后盡快檢測。另外，吹散次數(shù)過多也會(huì)影響細(xì)胞活力。故而 MTT細(xì)胞密度多采用 10000/ml， 100ul/孔。用含 15％胎牛血清培養(yǎng)液培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)，高的血清物質(zhì)會(huì)影響試驗(yàn)孔的光吸收值。 100ul的培養(yǎng)液對(duì)于 10的 4～ 5次方的增殖期細(xì)胞來說，很難維持 68h，如果營養(yǎng)不夠的話，細(xì)胞會(huì)由增殖期漸漸趨向 G0期而趨于靜止，影響結(jié)果，我們是在 4
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