mtt法檢測(cè)細(xì)胞活力講解(存儲(chǔ)版)
【正文】 值率線性關(guān)系不佳。加樣器操作要熟練，盡量防止人為誤差。 參加 DMSO ? 在同一批實(shí)驗(yàn)中最好不要更換 DMSO。 第二十二頁，共二十四頁。但由于不同細(xì)胞貼壁后面積差異很大，因此，在進(jìn)行 MTT試驗(yàn)前，要進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)其貼壁率、倍增時(shí)間以及不同接種細(xì)胞數(shù)條件下的生長(zhǎng)曲線，確定試驗(yàn)中每孔的接種細(xì)胞數(shù)和培養(yǎng)時(shí)間，以保證培養(yǎng)終止致細(xì)胞過滿 第二十四頁，共二十四頁。 ? 細(xì)胞密度偏大測(cè)出的吸光度也會(huì)偏大，細(xì)胞密度小吸光度也會(huì)偏??；另外跟細(xì)胞狀態(tài)也有關(guān)系，細(xì)胞狀態(tài)不好的話，吸光度值也會(huì)低的；細(xì)胞數(shù)目少，或者是培養(yǎng)的時(shí)間短， OD值也會(huì)偏低。可以輕拍，或者傾斜一點(diǎn)幫助吸液，但前提是細(xì)胞貼壁要比較牢。特別是新手， 20％的波動(dòng)也是常見的，所以很可能是技術(shù)原因引起的，特別是種板技術(shù)一定要過關(guān)。 關(guān)于細(xì)胞的接種 (鋪板 ) ? 細(xì)胞過了 30代以后就不要用了 。調(diào)零孔加培養(yǎng)基、MTT、二甲基亞砜。在不同時(shí)間點(diǎn)的測(cè)定 OD值，輸入 excel表，最后得到不同時(shí)間點(diǎn)的抑制率變化情況，畫出變化的曲線，曲線什么時(shí)候變得平坦了〔到了平臺(tái)期〕那個(gè)時(shí)間點(diǎn)應(yīng)該就是最好的時(shí)間點(diǎn)〔因?yàn)檫@個(gè)時(shí)候的細(xì)胞增殖抑制表現(xiàn)的最明顯〕。這樣，才能保證 MTT結(jié)晶形成酌量與細(xì)胞數(shù)呈的線性關(guān)系。 本卷須知 1． 選擇適當(dāng)?shù)募?xì)胞接種濃度。C避光保存兩周內(nèi)有效，或配制成5mg/ml保存在 20度長(zhǎng)期保存，防止反復(fù)凍融，最好小劑量分裝，用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光以免分解。每板設(shè)對(duì)照。 第五頁，共二十四頁。 ? 在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi)， MTT結(jié)晶物形成的量與活細(xì)胞數(shù)成正比。二甲基亞砜〔 DMSO〕能溶解細(xì)胞中的紫藍(lán)色結(jié)晶物，用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀在 490nm波長(zhǎng)處測(cè)定其光吸收值，可間接反映活細(xì)胞數(shù)量，從而反映細(xì)胞的增殖情況。 3. 5%CO2， 37℃ 孵育分別孵育 24小時(shí)后，倒置顯微鏡下觀察。 懸浮細(xì)胞操作步驟 ： ? 1〕將細(xì)胞離心收集后，調(diào)節(jié)細(xì)胞懸液濃度大約 1 10
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