【正文】 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　參考文獻1. 《全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范》，中國疾病預(yù)防控制中心， 。確定全使用干凈的一次性無菌實驗材料；使用防氣溶膠的加樣槍頭；殘留的底物沒有倒回原瓶；用乙醇定期擦洗微量加樣器；盛洗液的試劑瓶內(nèi)有足夠量的洗液；檢查分液、吸液操作；每周進行保養(yǎng)；分析倉門關(guān)閉嚴實；檢查背景值。檢查管路連接。提示有不合乎稀釋順序的值出現(xiàn)。對于極度敏感的樣品處理程序，結(jié)果可以報告為“ 含量高于180。如果需要定量的結(jié)果，原始樣品應(yīng)該使用極度敏感的樣品處理程序重新檢測。靶序列吸光度偏高( )所有的稀釋度的數(shù)值高于檢測的線性范圍。樣品最多帶有相當(dāng)于個細胞的。嚴禁在實驗室內(nèi)進食、飲水和吸煙以及使用化妝品。：兩個樣品結(jié)果超過177。如發(fā)現(xiàn)考核樣品缺失、量不足、空管等情況，及時書面回報，艾滋病參比實驗室負責(zé)補寄或更換。目前，艾滋病檢測實驗室通過參加艾滋病參比實驗室組織的病毒載量檢測能力驗證來實施外部質(zhì)量控制。 外部質(zhì)控品不合格，樣品需要重新檢測。隨機選出管外部質(zhì)控品，按照實驗室的檢測條件進行病毒載量檢測，將拷貝值換算成值，計算算術(shù)平均值（）和標(biāo)準(zhǔn)偏差（）。檢測過程質(zhì)控 所有試劑盒須嚴格按要求條件保存。嚴格要求三區(qū)的空氣流向：從試劑準(zhǔn)備區(qū)到樣品處理區(qū)，然后到擴增產(chǎn)物分析區(qū)，不能逆向流動。利用標(biāo)準(zhǔn)品制作循環(huán)數(shù)與載量的標(biāo)準(zhǔn)曲線就能對樣品載量進行定量檢測。利用已知起始拷貝數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)品可作出標(biāo)準(zhǔn)曲線，其中橫坐標(biāo)代表起始拷貝數(shù)的對數(shù)，縱坐標(biāo)代表值）。每一種檢測都有各自的步驟或試劑。病毒的定量檢測是采用定量標(biāo)準(zhǔn)品來完成的。這種結(jié)合的方法使用了實時擴增分析（ ），提高了對診斷質(zhì)量的要求。第四章 常用病毒載量檢測方法簡介目前常用的 測定方法為核酸序列依賴性擴增() 技術(shù)，代表產(chǎn)品為 及其升級產(chǎn)品熒光實時技術(shù) 儀；逆轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)（）技術(shù)，代表產(chǎn)品為 ；分枝信號放大系統(tǒng)（）技術(shù)，代表產(chǎn)品為 分析儀；實時熒光定量擴增技術(shù)（ ），與國產(chǎn)試劑盒均屬此類技術(shù)。不推薦使用自動除霜冰箱。 樣品的混勻：采集血液后，立即輕輕上下顛倒抗凝管約次，使血液與抗凝劑充分混勻。第二章 實驗室設(shè)置各種病毒載量檢測方法需要相應(yīng)的輔助設(shè)備才能完成檢測。由于國內(nèi)外還沒有可作為參考的病毒載量檢測及質(zhì)量控制的相關(guān)指南，因此本指南主要提出一些原則上的參考建議，其中定有不妥之處，希望廣大同仁提出意見，以便不斷完善。在積極組織實驗室能力驗證的同時，艾滋病參比實驗室也對實驗室技術(shù)人員進行培訓(xùn)，積極開展室內(nèi)質(zhì)控。編寫主持人：蔣巖編寫人員： 潘品良 蔣巖 李敬云 鐘平 尚紅 李太生審核咨詢專家及技術(shù)人員：邵一鳴 康來儀 朱效科 王佑春 汪寧 朱紅 郭志宏 季陽 劉海林 肖瑤 邱茂鋒 馬春濤編寫單位：中國疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病預(yù)防控制中心 參編單位：中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院上海市疾病預(yù)防控制中心中國醫(yī)科大學(xué)北京協(xié)和醫(yī)院技術(shù)顧問： , 美國國立衛(wèi)生研究院 過敏及傳染病研究所 . 美國 大學(xué)醫(yī)學(xué)中心實驗室克林頓基金中國艾滋病防治項目實驗室專家 . 美國華盛頓大學(xué)新英格蘭研究所 . 加拿大公共衛(wèi)生局疾病預(yù)防控制中心國家免疫學(xué)實驗室前 言隨著病毒載量檢測在艾滋病臨床輔助診斷和抗病毒治療監(jiān)測以及艾滋病科研工作中的廣泛應(yīng)用，我國開展該項檢測工作的實驗室日益增多。本指南是根據(jù)各種病毒載量檢測方法的技術(shù)要求，結(jié)合現(xiàn)行的國內(nèi)外相關(guān)技術(shù)規(guī)范而制定。病毒載量檢測及質(zhì)量保證指南（版）目錄第一章 總則第二章 實驗室設(shè)置第三章 樣品的采集、處理、保存、運輸?shù)谒恼?常用病毒載量檢測方法簡介第五章 室內(nèi)質(zhì)量控制第六章 外部質(zhì)量控制第七章 實驗室生物安全附表 常見問題分析和處理附表 病毒載量檢測樣品送檢及接收單附表 病毒載量檢測能力驗證樣品接收專用單附表 病毒載量檢測報告單附表 病毒載量能力驗證結(jié)果專用報告單（)附表 病毒載量能力驗證結(jié)果專用報告單（)參考文獻縮略語第一章 總 則意義 病毒載量是艾滋病防治工作中一項重要的實驗室檢測指標(biāo)。具體來說： ，有條件各區(qū)內(nèi)可分別設(shè)置緩沖間，以保證不同區(qū)之間始終完全分隔開。用于病毒載量檢測的樣品推薦采用抗凝血漿。 分離后，吸出血漿，分裝到無菌的聚丙烯螺口凍存管中，并注明分裝時間。、泄漏及污染。此方法可分成四個步驟：核酸釋放、提取、擴增和測定。該檢測試劑盒可以通過兩種樣品處理程序進行檢測，即標(biāo)準(zhǔn)的和超敏感的操作步驟，定量測定含量為拷貝毫升 。 分析儀根據(jù)定量標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)據(jù)計算每一個樣品的 的含量。發(fā)射的光強以相對光量值()表示。（） ，檢測的產(chǎn)物使用熒光標(biāo)記的寡核苷酸探針。 所有相關(guān)檢驗人員需經(jīng)操作培訓(xùn)，能獨立熟練地操作，并經(jīng)考核合格，持證上崗。，用乙醇或次氯酸鈉及時處理操作臺面。 實驗用水：要求使用無和酶的水。每次檢測都應(yīng)帶個外部對照，將得到的外部對照值標(biāo)在質(zhì)控圖上，根據(jù)是否在 值范圍判斷實驗結(jié)果是否有效，每次測得值在平均值177。 簽發(fā)人對結(jié)果的結(jié)論進行審核、分析、總結(jié)、簽字。鼓勵有條件的實驗室參加國際組織的活動。 T結(jié)果的報告和處理：參加的實驗室必須在規(guī)定的時間內(nèi)（收到樣品個月內(nèi)），用電子郵件報告實驗結(jié)果，并將病毒載量實驗結(jié)果報告單（附表）和打印的儀器原始記錄一起上報給艾滋病參比實驗室，后者將負責(zé)結(jié)果錄入和處理。：參評實驗室如對評估結(jié)果或其它方面存有異議，可以在收到結(jié)果后天內(nèi)向艾滋病參比實驗室提出異議，后者在核實情況后予以答復(fù)。當(dāng)具有潛在傳染性的物質(zhì)溢出時，立即用次氯酸鈉溶液或其它消毒劑處理污染區(qū)及器材；接觸過標(biāo)本的器材應(yīng)置有專用消毒劑的容器，與一次性物品一起在丟棄前進行高壓滅菌處理。. （二）問題原因 處理方法無效（）稀釋系列的數(shù)值未在檢測的吸光度范圍內(nèi)。報告的結(jié)果應(yīng)乘以稀釋因子。對于標(biāo)準(zhǔn)的樣品處理程序，結(jié)果可以報告為“ 含量高于180。所有靶模板的數(shù)值都不在線性測定范圍之內(nèi)。確信加入酶和開始此輪運行之間的時間少于分鐘。分析儀不能從孔內(nèi)吸取足夠的液體洗頭中有堵塞, 洗頭針頭彎曲, 廢液管連接松弛, 吸液泵損壞。標(biāo)準(zhǔn)曲線平坦或不正常加標(biāo)準(zhǔn)時板的缺口在右邊,或標(biāo)準(zhǔn)加入順序有誤。4. . .5. ， ， , ()