【正文】 10. 《人間傳染的高致病性病原微生物實驗室和實驗活動生物安全審批管理辦法》，衛(wèi)生部第號令，年月日起實施。確定試劑盒在運輸和到貨后儲存在正確的溫度；使用無菌槍頭；沒有吸取氣泡；封閉墊組裝無誤；加樣器經(jīng)校準(zhǔn)；小心處理測試板,防止濺灑；標(biāo)準(zhǔn)和對照加樣位置正確；按產(chǎn)品說明要求儲存, 配制；樣品,標(biāo)準(zhǔn),對照在吸取前至少震蕩秒。值高實驗被污染, 清洗不充分, 或有光泄露。分析儀底部的加熱托盤上有液體管路連接松弛或一洗頭的分液或吸液針管堵塞。重復(fù)整個實驗步驟包括樣品和質(zhì)控的制備、擴增和檢測。對于極度敏感的樣品處理程序，重新檢測。對于標(biāo)準(zhǔn)的樣品處理程序，結(jié)果可以報告為“檢測到 , 含量低于拷貝毫升”。報告結(jié)果根據(jù)所采取的標(biāo)準(zhǔn)的或極度敏感的提取方法可以是“ 沒有檢測到（ 低于拷貝毫升）”或“ 沒有檢測到（低于拷貝毫升）”。附表 常見問題分析（一）問題原因 處理方法血清或血漿樣品中有特殊物質(zhì) 化凍緩慢引起的細(xì)胞裂解離心至上清清亮 硅膠難以重新懸浮 樣品中核酸水平太高 劇烈震蕩混懸，由于洗滌洗脫效率不高可影響敏感度。安全細(xì)則、戴口罩、戴一次性乳膠手套。內(nèi)；一個假陽性；一個無效結(jié)果；一個抄寫錯誤。 T樣品的接收與保存：要求參加的實驗室收到考核樣品后，立即進行核對、檢查，填寫病毒載量檢測能力驗證樣品接收專用單（附表），天內(nèi)將接收專用單傳回艾滋病參比實驗室。通過參加考核，保證艾滋病參比實驗室的不同病毒載量檢測系統(tǒng)的有效性。 數(shù)據(jù)分析、結(jié)果報告 在試劑盒及外部質(zhì)控品結(jié)果滿足要求的前提下，對樣品進行分析。用無菌凍存管定量分裝，標(biāo)記，封口，凍存于80℃以下非自動除霜冰箱內(nèi)。、水浴箱用校準(zhǔn)合格的溫度計測量溫度，并做好記錄。 試劑準(zhǔn)備區(qū)：擴增試劑的配制、分裝和保存； 樣品處理區(qū)：樣品登記、分裝，核酸提取、保存和加樣； 擴增產(chǎn)物分析區(qū)：產(chǎn)物擴增的測定、結(jié)果分析、登記及報告。循環(huán)數(shù)與樣品載量成線性關(guān)系。每個反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號到達(dá)設(shè)定的域值時所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)值與該模板的起始拷貝數(shù)的對數(shù)存在線性關(guān)系。本方法定量系統(tǒng)中沒有內(nèi)標(biāo)記物，每次實驗設(shè)置一系列外部標(biāo)記，通過實驗樣品反應(yīng)強度與外部標(biāo)記樣品強度的比較確定實驗樣品的病毒拷貝數(shù)。 試劑盒版包括個主要步驟：試劑準(zhǔn)備；樣品制備；靶的逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生；用特異互補引物進行靶 擴增；通過比色與探針結(jié)合的擴增產(chǎn)物的測定。 結(jié)合（核酸序列基礎(chǔ)分析）技術(shù)與分子熒光探針技術(shù)（ ）檢測血漿中的 水平。. 樣品管破損造成樣品溢出、出現(xiàn)明顯溶血、凝血的樣品，不宜作病毒載量檢測；如果樣品已經(jīng)融化， 4℃保存并盡快檢測，記錄凍融一次。 樣品的保存：根據(jù)血漿檢測時間而定，天內(nèi)可在4℃暫時保存，個月以內(nèi)應(yīng)凍存于20℃以下，個月以上應(yīng)置于70℃以下。 樣品采集量：通常采集全血～, 采集的樣品量應(yīng)盡可能與定量采血管的刻度一致，采集量過多或不足，會造成血液凝固或被稀釋?？砂惭b排風(fēng)扇或其他排風(fēng)裝置。適用范圍 適用于我國開展病毒載量檢測工作的所有實驗室。在此基礎(chǔ)上，經(jīng)過多次修訂、補充和審定，于年月完成《病毒載量檢測及質(zhì)量保證指南》的最后定稿。在通過考核和積累經(jīng)驗的基礎(chǔ)上，年啟動了國內(nèi)病毒載量檢測能力驗證工作。自年艾滋病實驗室首次引進病毒載量檢測技術(shù)，截至年底，全國已經(jīng)配備了近臺病毒載量檢測儀，覆蓋了疾控、醫(yī)院、檢疫、軍隊等系統(tǒng)。本指南針對病毒載量檢測的實驗室設(shè)置、樣品管理、檢測技術(shù)、質(zhì)量控制、生物安全等方面提出指導(dǎo)。檢測病毒載量可以監(jiān)控和預(yù)測病程，指導(dǎo)艾滋病患者的抗病毒治療，包括確定治療時機、選擇治療方案、評價治療效果；結(jié)合疾病臨床癥狀和其它實驗指標(biāo)，可作為早期感染診斷的輔助手段；還可用于嬰兒早期感染的輔助診斷以及采供血機構(gòu)樣品的窗口期檢測。 樣品的采集 采樣器材：一次性抗凝真空采血管、持針器、蝶形針等。在凍存管上貼樣品編號。 樣品的運輸根據(jù)《可感染人類的高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本運輸管理規(guī)定》的要求運輸，并嚴(yán)格控制運輸?shù)睦鋬鰻顟B(tài)，防止樣品凍融。擴增后的產(chǎn)物使用 電化學(xué)發(fā)光（）系統(tǒng)進行檢測和定量，此系統(tǒng)包括親和素標(biāo)記的磁珠、生物素標(biāo)記的核苷酸片段（此片段可與新合成的產(chǎn)物的一端互補結(jié)合）及可特異與四種產(chǎn)物結(jié)合的探針（探針上標(biāo)記有銣元素），這四種探針可分別與不同的產(chǎn)物結(jié)合。標(biāo)準(zhǔn)的樣品處理程序中， 通過應(yīng)用裂解液裂解病毒顆粒從而直接從血漿中分離出來，然后用乙醇沉淀。該定量標(biāo)準(zhǔn)品補償了抑制因素的影響并且擴增過程的質(zhì)控使每一個樣品的– 得以準(zhǔn)確定量。產(chǎn)生的光強直接與各樣品中病毒或的載量成正比。檢測的原理基于熒光信號增長曲線與循環(huán)數(shù)相關(guān)。、簽發(fā)人應(yīng)具備對檢測過程進行分析、解決問題的能力。 儀器設(shè)備質(zhì)控、溫濕度計須經(jīng)計量部門校準(zhǔn)，每年一次。 操作過程質(zhì)控嚴(yán)格執(zhí)行儀器和試劑的標(biāo)準(zhǔn)操作程序（），不得擅自修改。內(nèi)方為有效。 按不同方法的要求，以拷貝毫升或國際單位毫升為單位報告樣品的病毒載量值。 病毒載量檢測能力驗證（）的實施 T樣品組成：每次份。